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IHC求助|小鼠4T1肿瘤组织染不出CD8
麻黄连翘赤小豆
如果染不出来可能还是抗原修复的问题或者封闭的问题,组织固定时间太短也可能导致抗原分解或者弥散
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问
抑菌实验
此用户已注销
最好是需要的、具体的要知道某种菌悬液浓度的方法:首先,取一定量菌悬液,测定其OD值,然后稀释100倍-1000倍,然后培养基培养,数其中的CFU数,换算成相应的浓度。然后根据这些数据来换算1-9×104对应的OD值是多少,下次培养到相应的OD值就行了,具体多久就要根据你的生长曲线来了。
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问
组织放在4%的多聚甲醛中保存放在-20度保存2个月,还能用吗?
府宅
使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48h,固定时间太久组织会变脆如果是在温度4°以下最多可以放一个月,但是肯定会损失抗原的
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问
求助:细胞免疫化学实验抗体的问题?
bamboopiggy
一般不用enhacer,加了这个容易出假阳性
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问
免疫荧光:为什么细胞核周围总是存在有一些蓝色的小点点?
麻黄连翘赤小豆
可能是泛染了,封闭的时候需要山羊血清等你会好一些
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问
免疫荧光:视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点的原因有哪些?
dxy_gwrp7ndq
PBS 未过滤,未溶解的残渣黏附而导致
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问
求助关于免疫实验抗原的问题?
此用户已注销
由于组织在甲醛或多聚甲醛在固定中,发生蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而掩盖抗原决定簇。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定簇重新暴露,提高抗原检测率,常用方法通常使用高压加热修复,使用高压加热修复对修复温度和时间的把握十分重要,温度越高修复时间越短,温度与修复时间呈负相关。修复结束后注意室温冷却,让蛋白自然复性。另外,大家尽量使用过量的抗原修复液,防止高温液体挥发干涸,对切片造成不可逆影响。
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问
组织样本无法及时进行免疫组化实验,怎么保存最好?
whilt-shirt
可以用组织保存液放-80保存。
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问
免疫荧光染色,非特异性染色太高,怎么解决呢?
balalaLy
封闭用好一点的封闭液,设置不加一抗的阴性对照,确保拍照的参数一致
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对于多色免疫荧光,是同时孵一抗,然后同时孵二抗,还是分开孵育?
whilt-shirt
一般是分开敷育的,这样效果会好一些
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只要是荧光抗体就可以⽤于共聚焦显微镜吗?
guofei11227
是的,有荧光抗体就可以用于共聚焦显微镜
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用流式做免疫表型分析不能立即分析,可以用甲醛固定后放冰箱过几天再染色上机吗?
Eason老歌迷
如果不能及时上机检测,可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min,清洗细胞,之后用适量的Stain Buffer重悬细胞,4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。
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问
免疫荧光用PBS和PBST效果差别大吗?哪一个更好一些
天一湖医者
个人认为PBS还是要好一些,因为PBST里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以,细胞培养级别就是纯度更高一些,你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了!
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免疫荧光实验中,怎么改善荧光易淬灭问题
麻黄连翘赤小豆
可加防荧光淬灭剂,或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照,不拍的时候移开玻片
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细胞免疫荧光固定后可放多久
dxy_gwrp7ndq
可以使用新鲜配置的多聚甲醛来固定,固定后立刻转移到5%BSA的PBS溶液中(最好放防腐剂),可以在4度保存一段时间.
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细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
balalaLy
沉淀可能是细胞碎片或者是核酸,离心后注意不要吸到就行
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在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢
balalaLy
要么是胶片本身曝光了,要么是压胶片的时间长了,建议可以同时压4-5张胶片,时间1分钟以内
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求助:免疫组化染色全是一片红色?
府宅
组织变干一下子染太多片子的时候,容易出现这种情况。解决的办法就是不要贪多嚼不烂。一次少染几张。还有就是试剂充分覆盖组织,超出组织边缘2 mm。然后用PAP笔在组织周围画一个圈圈,把修复液圈在里面。避免修复液流走。圈圈应该距离组织边缘3-4 mm。 浸泡时间过长切片在缓冲液或修复液里面浸泡过一夜,也会引起杯具。这都是偷懒的做法。但是有时候也是可以偷一下懒的。独门秘技就是4°C冰箱。只要把容器放在4°
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问
细胞是100%阳性却出现分群
此用户已注销
培养的细胞出现污染、细胞自身表达荧光蛋白基因、药物处理后都可能出现某通道上有阳性表达。
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问
如果流式细胞术检测到细胞是CD38+,但是CD138-,如何判断是否是浆细胞来源呢
Eason老歌迷
可以参看这篇文献”流式细胞术检测CD38、CD138在急性白血病、浆细胞骨髓瘤表型分析中的意义”,讲的很详细。
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