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免疫荧光实验爬片上的细胞每次根本都不能洗5min,特别容易掉,可能每次洗到最后,细胞都没了
Dr_劉医生
我的经验可能原因是细胞密度过高,特别是贴壁细胞,一团一团的,并不是很好的平面化,需要用枪头加细胞悬液给弄平,有个之前找的方法供参考。建议用10μl的小枪头吸取细胞悬液,在25mm的细胞爬片上从玻片外圈向内圈转圈加样,这么做相当于在缓慢加样的过程中,玻片上的细胞又完成了一次从外向内和从内向外的混匀过程,防止某一部位的细胞聚集。加样结束后,镜下观察细胞初步密度。如果细胞密度过大,可以将玻片上的细胞悬液
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问
为什么细胞免疫荧光只能看到核,胞浆或者整个细胞的形态为什么看不到?
bamboopiggy
你核是用dapi染的吧?那个好显。然后看你的目的蛋白的位置是什么,然后选的抗体要好用。
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问
NCI-H716细胞分化问题
dxy_gwrp7ndq
基质胶可以有效帮助上皮细胞等各类细胞的附着和分化
3 回答
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问
我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
麻黄连翘赤小豆
如果是蛋白提取液的话,有沉淀说明蛋白提取出来了,很清亮说明里面蛋白含量少,都看不见
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问
测点熔点时,遇到加热过快怎么办?
Eason老歌迷
一般要求缓慢升温,仔细观察。升温速度过快,会导致测定值偏高。升温速度过慢有影响测定效率,延长测定时间。你可以在外面再套个管,管里装上升温慢的溶液。
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问
为什么石蜡切片切出来的很多皱褶呢?
balalaLy
石蜡块温度偏高就会起褶,继续冷冻一下
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问
20g小鼠卵巢组织切片该切成多厚的呢?
balalaLy
组织切片一般到6um以下就能够做出比较好的形态了,当然再薄一点也是可以的,只要你切得出来
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问
免疫荧光实验中间接标记会放大信号是什么原因?
bamboopiggy
间接检测方法通常有着更高水平的灵敏度,并产生更强烈的信号。信号经过间接方法放大,因为至少有两个标记的二抗与每个一抗结合。不过,二抗的使用需要额外的封闭步骤和对照。
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问
免疫组化-研究生科研问题
whilt-shirt
一般来说至少重复3次,每次每组至少3个样本
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问
求助求助
Dr_劉医生
这个检索关键词查文章就行。小白先看中文了解概述,再去找英文。近年的学位论文方法学部分更细致,供参考:王志盛. 黄连素对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用研究[D].河南中医药大学,2020.DOI:10.27119/d.cnki.ghezc.2020.000050
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问
鱼类肝细胞原代培养,有大佬使用M199/L-15混合培养基的吗?比例是多少?
此用户已注销
将0.25%的胰酶消化液与L_15培养基按1:1的比例
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问
钙成像的Area under the curve用Origin2018软件怎么分析呢?
红嘴小花猫
如果你要分析钙成像峰值大小体,可以使用函数来判断,取纵坐标数值。
3 回答
617 围观
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问
制备单抗进行电细胞融合的时候,缓冲液的选择很重要吗?细胞不成串怎么解决?
Dr_劉医生
首先肯定buffer很重要,不然细胞融合和密度都有问题,如果商购专用的buffer按protocol来基本没问题;不成串的原因之一也是缓冲液不对,还一个两组细胞的比例得合适,看具体实验1:1,1:2都有。制备单抗的方法可参考方法学部分2.4()Song G, Huang L, Huang Y, Liu W, Wang M, Hua X. Electrofusion preparation of a
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459 围观
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问
免疫组化:着色部位不对是什么情况?本是胞浆抗原,但实验显示结果却在胞核有着色?
Eason老歌迷
做了几次实验呢?可以多做几次 ,可能是你的染色过程有问题。
3 回答
384 围观
3 回答
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问
显微镜视野中不是细胞的部分也有荧光信号的原因是什么?怎么解决啊?
Eason老歌迷
可以调整一下显微镜的曝光时间,补偿时间等。
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271 围观
3 回答
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问
免疫荧光用的玻璃片怎么灭菌啊?酒精可以吗?
dongshenmedonga
我们一般用酒精擦拭,晾干即可使用了。也有无菌包装的
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问
免疫组化:出现切片边缘着色的现象,可能是什么原因导致的?我应该怎么避免呢?
府宅
切片上滴加的试剂未充分覆盖组织,边缘的试剂容易首先变干,浓度较中心组织高而致染色深。试剂要充分覆盖组织,尽量避免选用坏死较多的组织。
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问
做乳腺组织的免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜看很好,有阳性信号,但是拿到荧光镜下看,我的阴性对照一片绿,像非特异性染色,哪个是真的
whilt-shirt
有可能是荧光显微镜波长不太对,以共聚焦为准
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问
免疫荧光实验结果在采集图像时,对图像加上标尺,为什么半定量分析时原始图像不佳
bamboopiggy
其实,你用ps加标尺会更好一些。但是加不加标尺和你半定量分析没关系,可能是你存的图片的格式是jpeg,而不是tiff的原因。
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问
免疫荧光做DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色,怎么确定DAPI的合适量
bamboopiggy
我直接买的现成的带dapi的固态封片剂,一般就不会那么多了。要不你就要自己摸一个浓度,然后每次染了去看。
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