免疫荧光实验爬片上的细胞每次根本都不能洗5min，特别容易掉，可能每次洗到最后，细胞都没了

我的经验可能原因是细胞密度过高，特别是贴壁细胞，一团一团的，并不是很好的平面化，需要用枪头加细胞悬液给弄平，有个之前找的方法供参考。

• 建议用10μl的小枪头吸取细胞悬液，在25mm的细胞爬片上从玻片外圈向内圈转圈加样，这么做相当于在缓慢加样的过程中，玻片上的细胞又完成了一次从外向内和从内向外的混匀过程，防止某一部位的细胞聚集。
• 加样结束后，镜下观察细胞初步密度。如果细胞密度过大，可以将玻片上的细胞悬液吸回再重新稀释；如果细胞密度可以，只是还存在部分细胞聚集，可以用5ml的注射器针头轻轻拨动细胞悬液，注射器针头相对于10μl的枪头还是细的，不会破坏细胞形态。

你把玻片预先用促贴壁试剂处理一下试试。

爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意这一步没做好，后面掉片会很严重。感觉你还是细胞没有贴壁牢靠。

洗的时候顺着侧壁加液体，不要用力晃，洗三次就可以了