悬浮细胞做免疫荧光如何贴壁

都是细节问题！

1. 爬片，一定要注意密度密度！！细胞不能太多，连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少，这样细胞也会被洗掉，拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可，在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上，会导致细胞形态和培养瓶内不一致，可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片，再接种细胞即可；

2. 固定固定，细胞长好后一定固定好，非常影响后面拍片，4% 多聚甲醛、甲醇、丙酮均是可选用的固定液，固定时间在 10-15 分钟即可。记得之前用PBS清洗一次；

3. 通透液的问题，杂质也可能影响你的成片；一般用TritonX-100（PBS 配制），具体浓度自行配制，0.2，0.3%都行.

取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm，5min）2次，或用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入95％乙醇或丙酮中固定。将已经固定的细胞玻片放入盖片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。

可以使用PDL处理过的玻片，效果还行，很少脱片。