实验问答22,018,229 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问NPN检测大肠杆菌外膜通透性

vlinine

不一定就是溶剂的问题，也有可能是大肠杆菌悬液的溶度问题。

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问患者外周血pbmc采集不到可以选择与患者hla分型相同的材料吗

汤姆卜丽波

可以的，我们用的就是HLA分型检测的

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问请问半抗原结合蛋白载体之后是成为胸腺依懒性抗原还是非胸腺依赖性抗原?还是二者都有?它刺激B细胞产生抗体一定需要T细胞辅助吗?

Eason老歌迷

半抗原与蛋白质载体结合后，就获得了免疫原性。根据抗原刺激B细胞产生抗体是否需要T细胞协助分为两类：胸腺依赖性抗原和胸腺非依赖性抗原。

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问请问大家做CHIP实验跑Q-PCR的引物是找公司设计还是自己设计的呢?

万能小宇宙

如果不计较成本的话，公司设计验证是最方便的，售后也会一并解决，如果实验要考虑整体成本，引物设计相对不是很复杂，自己设计就可以的。

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问大肠杆菌中组成型中等或弱强度启动子

Eason老歌迷

通常使用的中等或弱强度可调控的启动子有lac(乳糖启动子)、trp(色氨酸启动子)、tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子)、lpl(l噬菌体的左向启动子)、t7噬菌体启动子等。

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问免疫组织化染色实验要注意哪些事项？

秋秋欣欣

1、防止假阳性与假阴性，防止操作中的污染；2、规范操作时阳性与阴性对照选用2种以上同类抗体。目前肿瘤均为相关抗原，特异性不足，多种同类抗原可提高阳性率；3、正确评价免疫组化的结果，其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等多种因素影响；4、合理选择抗体，既要符合设计要求，又要价廉物美；5、待检标本抗原保存要好，要求快速、新鲜、充分地固定，福尔马林液固定标本要做抗原修复。

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问关于基因多态性SNP连锁不平衡问题

Eason老歌迷

这个不一定吧，你的分析目的是什么？确定这两个snp中只有一个是对性状真正有影响的，另外一个只是因为连锁该snp才有统计学显著意义。

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问黑曲霉相关问题

Dr_劉医生

霉菌当然属于食源性致病菌，常见会导致肺曲霉病，变态反应性曲霉病，全身性曲霉病；因感染部位不同，临床表现存在差异。此外，可以和其他致病菌一起检测，常用的就是pcr,又是RT-PCR；近些年有SAT的技术引入，可以多菌种检测。

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问有没有什么办法能够去除培养基中的LPS，又不影响实验结果啊

dxy_gwrp7ndq

(1) LPS分子量大于1万, 依据这个特点, 研究者建立了以下几种方法:超滤:选用合适的超滤膜可以将溶液中的LPS完全去除, 适用于目标产物分子量小的溶液。密度梯度超离心:根据LPS与溶液中蛋白质的密度、沉降系数等差异, 利用蔗糖密度梯度超离心的方法来分离除去LPS。然而因LPS不同的存在形式, 分子大小、密度、沉降系数的不同, 此方法应用受限。活性炭吸附:适合于组分较为简单的小分子的溶液中或水

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问构建重组质粒筛选蓝白班，没有蓝色菌落

dxy_n4jex0k8

重组效率高就没有蓝色啊。可以做个菌落pcr看看，如果都有目的条带就是重组率高。我们实验室都不做蓝白斑，仅是抗性筛选，做菌p二次筛选。

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问大肠杆菌中有中等强度启动子吗

汤姆卜丽波

lac启动子：它来自大肠杆菌的乳糖操纵子，是dna分子上一段有方向的核苷酸序列，由阻遏蛋白基因(laci)、启动基因(p)、操纵基因(o)和编码3个与乳糖利用有关的酶的基因结构所组成。lac启动子受分解代谢系统的正调控和阻遏物的负调控。正调控通过cap(catabolite gene activation protein)因子和camp来激活启动子，促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻

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问紧急求助转录抑制因子

汤姆卜丽波

应该是高温反而不表达了吧高温就会抑制转录吧

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问有用cst的p62抗体跑出来条带的大神吗

bamboopiggy

我用过，cst的p62 很好用啊，我是300mA，转了2小时。

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问Perforin

Dr_劉医生

可以用流式做胞内染色，第一步要固定细胞，一般采用多聚甲醛，使细胞固定在一定的形状，即使细胞膜破裂细胞也能保持在这个形状而不发生碎裂：第二步，需要用打孔剂在细胞膜上打孔，同时加入荧光素偶联抗体，使抗体能够通过细胞膜上人为的小孔进入细胞内部与细胞因子结合。在此之前需利用高尔基体阻断剂（brefeldinA,BFA）阻断细胞因子的分泌，而不影响细胞因子的合成，让细胞内细胞因子的含量达到流式检测的标准。具

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问养的H358细胞表面有很多白色的小球，请问这是有污染吗？

bamboopiggy

H358 是人肺癌细胞系。你先看看你这个小白球是只在有细胞的地方有，还是所有地方都有，如果是只在有细胞的地方有，可能是因为营养问题，细胞的状态不好。如果是全都有，可能就是污染了。

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问请问有人做snu387？transwell 24孔板，上室加多少细胞呢？

bamboopiggy

snu387 是肝癌细胞系，有文献说是放了5x10^4, 参考文献题目：ARK5 promotes invasion and migration in hepatocellular carcinoma cells by regulating epithelial‑mesenchymal transition

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问染色体玻片老化过度、怎么补救

秋秋欣欣

可以提高荧光信号，变形较轻的应该还可以出

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问心脏蠕动机灌注

此用户已注销

如实验室没有专用的灌注系统，就用医院的普通的输液器即可，小鼠最好用儿童用输液器，剪开胸廓后要先剪开右心耳放血，然后直接在心尖处（针的长轴与心脏长轴基本一致）插入灌注针，开始不熟练可在升主动脉处看到灌注针（为了防止损伤心脏和血管，可将针尖磨钝），另外肝脏很快变色也是指证之一。灌注先用生理盐水冲洗，不一定要加肝素抗凝，只要熟练后灌注效果差不多。以肝脏颜色变白为止，改灌PFA。灌注时水位差不宜太高，约8

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问（求助）细胞消化使用的胰蛋白酶是否可以用于抗原修复

申东熙老伯

最好不要，胰酶消化能力比较强，抗原修复也可以用柠檬酸钠。

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问求助求助

Dr_劉医生

这个检索关键词查文章就行．小白先看中文了解概述，再去找英文。近年的学位论文方法学部分更细致，供参考：王志盛. 黄连素对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用研究.2020.河南中医学大学，MA thesis.

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