实验问答21,970,607 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问做ELISA实验，三遍，复孔之间重复性差异很大是什么原因呢？

dxy_r9ji8ui4

差异大是多大？一般要求不能超过15%，竞争法有时20%也能接受还有不要压着标曲的检测下限去测量，尽量高中低三档同时观察，非压着检测限的值去测，肯定容易重复性差标曲一定要做好，r2＞0.99以后再谈别的，要看计算后的浓度值，不能看OD读值。每次实验标曲必做。标曲拟合方程尽量用4pl，拟合度更好

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问启动子结合元件

loveliufudan

是的，这可以说明启动子中含有这个TTTGTT序列作为转录因子结合元件。在DNA序列中，启动子的互补链是与正常的启动子序列相反的链，并且它们的碱基配对情况是可以互相转换的。因此，如果TTTGTT序列只在启动子的互补链中被发现，可以说明这个序列是在启动子正常序列中存在的。但是，需要进一步的研究和验证来证明这个结论。

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问大佬们，我刺激物是4个不同的重组蛋白，怎么加呢，每个蛋白10微克/毫升吗？还是每个2.5？

bamboopiggy

你需要做预实验摸一下条件，如果都加10ug，可以就加10ug，不行就要减量

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问激光共聚焦扫描显微镜观察ROS荧光强度需要加DAPI染核吗？谢谢

bamboopiggy

最好加上，展示的时候可以不展示，但是如果没有，再补就比较麻烦

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问网状meta的p值怎么算

我不是曾博

很疑惑？为什么要给p值？不是都有95%区间了么？

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问如何判断一个转录本对应哪一个基因

土井挞克树

大概率是可变剪切形式，可以使用已知的酶去裂解，然后检测裂解片段。

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问你好，我有一批乳腺癌的肿瘤组织的样本，我对乳腺癌上表达的一些指标做了免疫组化染色，我想请问一下，如何评分。

汤姆卜丽波

采用半定量结果判断，分别对镜下阳性细胞的百分比与染色强度给予评分。阳性着色细胞数：每张切片上观察5个高倍视野(×200)，计数阳性细胞百分比，阳性细胞数<5％为0分，5％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，76％～100％为4分。阳性着色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者计分相乘即为阳性等级：0分为阴性(-)，1

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问查找内源启动子序列

loveliufudan

要查找非模式生物的内源启动子序列，你需要首先找到这些生物的基因组数据库。你可以使用在线数据库如NCBI的GenBank来查询非模式生物的基因组信息。然后，你可以使用bioinformatics工具，如BLAST来搜索基因组中的启动子序列。另外，你还可以使用专门的启动子预测软件，如PlantProm, PlantCARE, PlantPilot等来预测非模式植物的启动子序列。

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问transwel背景像水墨画…有一样的吗，求解决办法

battier01

看一下是不是哪里没有弄干净，小室或者镜头

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问流式模板有过一次重建。重建前后补偿发生一定的变化。重建前和重建后的样本是否可以放在一起比较MFI

Dr_劉医生

不建议放一起比较，重建前后的模板有补偿的参数差异，存在系统误差。

3 回答270 围观

问小白:把基因分为高低表达组，可以依据原始的counts数据分组吗？比较不同组别的基因表达情况，可以直接比较原始的count数据吗

huarenqiang5

可以依据原始的counts数据分组。

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问RAW巨噬细胞极化求助

loveliufudan

这种情况可能是由于细胞在当前状态下对LPS刺激的反应较少。可以考虑以下几种方法来改变细胞的反应性:1.选择不同类型的刺激物，例如IFN-γ或TNF-α等。2.尝试使用不同浓度的LPS刺激细胞，试验不同时间长度。3.尝试使用其他细胞激活剂，例如PMA或ionomycin等。4.尝试使用其他细胞系或细胞来源。5.检查培养条件，确保细胞在适当的温度和湿度条件下培养。6.选择培养细胞时机，确保细胞处于适当

1 回答2550 围观

问HepG2细胞油红0染色这样算染上了吗？

huarenqiang5

是的，你的这个从片子上看已经染上了。

3 回答1296 围观

问关于T细胞

huarenqiang5

1、测Treg的时候不需要刺激，CD4+CD25+在细胞膜上，FOXP3+细胞内的转录因子，都是固有表达的蛋白，而IL-17是本身表达的都分泌都细胞外了，所有需要刺激、阻断剂、固定剂、破膜剂等，具体步骤应该你有了。2、一般刺激剂需要用培养基稀释到母液浓度（一般为工作浓度的500倍到1000倍）后分装，然后刺激的时候直接加到培养基中；PMA贮存液：PMA 溶于DMSO，浓度为0.1mg/ml，-20

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问溶血基质会影响GM-CSF检测吗？为什么

huarenqiang5

溶血基质当然会影响GM-CSF的检测。

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问GLUT4免疫组化分析

bamboopiggy

看图片实验组中glut4是高表达的，可以继续做

3 回答274 围观

问石蜡包埋组织不能马上脱水有什么办法保存么？

土井挞克树

石蜡的话可以常温保存之后再脱水的。

3 回答744 围观

问caspase3免疫组化数据分析？

huarenqiang5

染色结果半定量分析：以染色强度结合阳性细胞数百分比综合计分，组织切片中胞质染为淡黄色至棕褐色者为阳性细胞标志。染色强度以多数细胞呈现的染色特性（染色深浅需与背景着色相对比）计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比即某类细胞5个视野（每400×高倍视野计数100个此类细胞）的阳性细胞平均数：0～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为

2 回答1404 围观

问胶体金快速检测试纸条全血样本处理方法求教

土井挞克树

可以进行抗凝处理或者使用pbs冲洗

1 回答809 围观

问单克隆抗体产品调试出现非特异

此用户已注销

抗体的非特异性结合可能是由于对相似表位的识别交叉反应产生的，它也有可能是筛选的杂交瘤额外链与目标抗体的共表达产生的

3 回答380 围观

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