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        做ELISA实验,三遍,复孔之间重复性差异很大是什么原因呢?

        相关实验:酶联免疫吸附(ELISA)实验

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        1999时光

        第一次的实验做四个复孔,加样品都是抵着孔壁加的,第二次也是四个复孔,为了准确加所有的样品的时候都换了新枪头抵着孔壁加的,第三次做了六个复孔,同一样品间用的一个枪头,然后是滴加的,三次实验复孔间重复性都很差,这是为什么呢?


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        8 个回答

        user-title

        dxy_r9ji8ui4

        有帮助

        差异大是多大?一般要求不能超过15%,竞争法有时20%也能接受

        还有不要压着标曲的检测下限去测量,尽量高中低三档同时观察,非压着检测限的值去测,肯定容易重复性差

        标曲一定要做好,r2>0.99以后再谈别的,要看计算后的浓度值,不能看OD读值。每次实验标曲必做。标曲拟合方程尽量用4pl,拟合度更好

        user-title

        柠檬想太多

        有帮助

        最主要的应该是洗板问题,需要洗干净,甚至用枪头沿侧壁吸干净。

        甚至有钱的去买洗板仪。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑还是实验条件的差异,每个孔内存在条件差异,才会重复性差。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        建议从以下几点考虑:

        1、每次使用新的封板膜,避免试剂挥发、交叉污染干扰;

        2、标准品溶解方式,稀释梯度是ELISA实验的关键步骤,需严格按照说明书操作;

        3、移液器的使用,确定移液器移液准确,且建议每次选用相同的移液方式;

        4、操作流程控制一致:多通道移液器or单通道移液器。选用ELISA震荡摇床,确保样品充分孵育结合;

        5、建议选择高、中,低不同区段进行观察,勿仅选择检测限位置样本。

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        可能是你样品不均匀。使用连续加样法可以减小误差。

        user-title

        1999时光user-title

        样品使用前离心混匀了也会存在吗

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        重复性差好像是Elisa的通病,包括类似的一些蛋白活性检测实验也是如此,可能不是操作的问题,是试剂盒包被的问题。

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        低着管口没问题,要看加完枪头有没有残留,有的话也会影响的

        user-title

        loveliufudan

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        复孔间重复性差的原因可能有多种:

        1.样品预处理差异:样品预处理过程中可能存在差异,如提取效率不同、提取稀释比例不一样等。

        2.反应液不均匀:液体在滴加或倒置时可能不均匀,影响试剂配制和使用。

        3.滴加/倒置误差:如果在滴加或倒置样品时出现误差,也可能导致复孔间的差异。

        4.枪头问题:使用的枪头的状态和质量可能不同,导致加样误差。

        建议您仔细检查样品预处理流程和试剂配制过程,确保液体在加样过程中均匀,并使用相同质量的枪头。

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