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实验问答23,917,588 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

问请问EdU和Ki67做免疫荧光染色，怎么同时染

sswei

EDU是一种新型的非放射性同位素细胞增殖检测的方法，在细胞培养、实体组织及临床研究中得到了广泛的应用。该技术可用于细胞成像、流式、细胞示踪、DNA损伤修复检测、线粒体活性检测以及病毒增殖活性检测等，EdU亦适用于活体注射。与传统的免疫荧光染色检测方法相比，EdU检测法更简单、更快速、更准确，不需要严苛的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增

2 回答4164 围观

问免疫组化图片明明肉眼可见是增强的，但是Image J分析mean值却反而下降，这是为什么呀

土井挞克树

有可能是image的灰度值没有设置正确，image的参数设置错误就会出现相反的结果

2 回答1062 围观

问请问哪位大神有肠道HE染色的protocol？🙏

loveliufudan

以下是一般肠道HE染色的protocol，供参考：材料：1.肠道组织切片2.1%硫酸铁溶液3.0.5%氯化钡溶液4.酒精：70%、90%、95%和100%5.苏木精染色液6.伊红染色液7.脱水剂：丙酮和xylene8.封片剂步骤：1.将切片放入1%硫酸铁溶液中，浸泡5分钟，去除多余的溶液。2.将切片放入0.5%氯化钡溶液中，浸泡2-3分钟，去除多余的溶液。3.将切片置于70%乙醇中，浸泡5分钟，然

3 回答569 围观

问aSMA抗体为什么染进核了？求助求助！

loveliufudan

如果您的aSMA染色显示出了细胞核的颜色，可能会有以下几种可能性：实验操作失误。例如，未完全去除细胞外的aSMA抗体，或者使用了与aSMA抗体交叉反应的抗体。染色效果异常。可能是染色试剂批次变异，或者是染色温度、时间等实验条件不恰当。样本细胞异质性。不同的细胞类型在染色效果上可能会存在差异，可能会导致aSMA染色在细胞核中出现颜色。

2 回答372 围观

问想用受体拮抗剂处理细胞，如何证明受体拮抗剂使受体是去了活性?

loveliufudan

为了证明受体拮抗剂使受体失去活性，您可以使用以下方法：放射性配体结合实验（Radioligand binding assay）：该方法可用于测量细胞膜受体的结合活性，利用放射性标记的配体与受体结合，通过测量剩余的未结合的配体来确定受体活性是否被抑制。使用受体拮抗剂处理细胞，如果受体失去活性，则绑定配体的数量会减少。細胞酶連結免疫吸附分析（Cell-based ELISA）：该方法利用受体特异性抗体

2 回答506 围观

问GPCR抗体药物的blocking实验

sswei

流式细胞术检测比放射性元素检查的灵敏度差，准确性低。

3 回答874 围观

问求助！！！！！

loveliufudan

在运行PmTOR Western blot实验时，常用的marker有常规的蛋白质分子量标准品（如Rainbow™ 磷酸化标准品或PageRuler™ Prestained Protein Ladder等），以及PmTOR的两个磷酸化位点Ser2448和Ser2481。这些marker可以用来确定PmTOR蛋白在Western blot上的位置，并且可以用来验证实验条件是否正确。同时，还可以使用总

1 回答199 围观

问免疫荧光细胞骨架没有染上，反而染到了细胞核是什么原因？

sswei

抗体质量问题，抗体特异性差所致。

3 回答890 围观

问如何准确确定菌株里有没有某个基因

balalaLy

或许摇个菌液送测序最简单快捷了，

4 回答922 围观

问悬浮细胞转染

土井挞克树

可能是存在样本降解出了这一个条带，或者其他杂质污染了。

3 回答415 围观

问抗体动态性研究

土井挞克树

最有效的是质谱法和免疫印迹，可以区分不同抗体的动态性差异

3 回答381 围观

问活化的caspase3切割完底物后自身会降解吗

土井挞克树

会被降解，但是一般建议外部添加，可以干净消耗。

4 回答537 围观

问胞膜GABA受体染色

龙大人驾到

要观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布，可以尝试以下几种实验设计：1. 免疫荧光染色：使用特异性的抗体标记GABA受体，在细胞水平下观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布情况。可以使用荧光探针或荧光标记的抗体等方法进行检测。通过共聚焦显微镜等技术观察荧光信号的分布情况。2. 膜蛋白分离：使用细胞膜蛋白分离试剂盒等方法，将胞膜和胞浆分离。然后使用Western blot或免疫印迹等技术检测GABA受体在胞

4 回答575 围观

问生物学转录组测序请教

土井挞克树

只能根据生鱼片的图形去找可变剪接符合大的那个转录组，如果想要确定必须要测序。

3 回答579 围观

问关于Raw263.7巨噬细胞极化问题，加LPS后，如何判断诱导其向M1型极化成功了呢？

土井挞克树

需要加细胞因子，然后观察m1分泌蛋白的分泌情况判断

4 回答2487 围观

问WB蛋白在37到45范围内用哪个浓度的分离胶分离比较合适?

你猜猜乌鸦座

一般蛋白分子量在20-60kDa之间选12%的分离胶

6 回答1621 围观

问组织芯片做多重免疫荧光如何避免组织脱离?

土井挞克树

脱蜡前进行水化，可以防止组织脱离

3 回答621 围观

问多重免疫荧光为什么会飞片?

loveliufudan

造成多重免疫荧光飞片的原因有以下几个方面：治疗组织不当：在制备组织样本时，固定和处理组织的方法和条件可能会影响组织的完整性。如果组织未能充分固定或处理不当，组织结构会受到破坏，导致组织容易脱落。贴片不当：在贴片时，如果载玻片上的组织样本未能均匀涂布或压实，样本就会容易脱落。此外，如果载玻片表面存在污染或未经适当处理，组织样本的附着力也会受到影响。洗涤和染色条件不当：在染色和洗涤过程中，如果使用过于

3 回答542 围观

问感受态细胞转化时，热激时间可以引导入的DNA大小进行调整么？还是在60秒到90秒就可以

龙大人驾到

感受态细胞转化时，热冲击的时间是非常重要的，它能影响DNA片段的渗透和稳定性，从而影响到细胞转化效率。一般来说，热冲击的时间应该在60秒至90秒之间。这个时间范围内，热冲击可以促进DNA片段的进入细胞，但如果时间过久，则有可能导致DNA片段的降解和稳定性下降，从而对细胞转化效率造成不良影响。此外，DNA的大小也会影响细胞转化效率，较小的DNA片段通常比较容易进入细胞并被稳定地表达。因此，在进行感受

6 回答2932 围观

问FITC-Dextran做抗原吞噬细胞的原理是什么呀

土井挞克树

FITC-Dextran具有抗原呈递功能，还可以被特异性识别。

3 回答1992 围观

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