实验问答21,924,435 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问GPCR抗体药物的blocking实验

sswei

流式细胞术检测比放射性元素检查的灵敏度差，准确性低。

3 回答814 围观

问求助！！！！！

loveliufudan

在运行PmTOR Western blot实验时，常用的marker有常规的蛋白质分子量标准品（如Rainbow™ 磷酸化标准品或PageRuler™ Prestained Protein Ladder等），以及PmTOR的两个磷酸化位点Ser2448和Ser2481。这些marker可以用来确定PmTOR蛋白在Western blot上的位置，并且可以用来验证实验条件是否正确。同时，还可以使用总

1 回答177 围观

问免疫荧光细胞骨架没有染上，反而染到了细胞核是什么原因？

sswei

抗体质量问题，抗体特异性差所致。

3 回答755 围观

问如何准确确定菌株里有没有某个基因

balalaLy

或许摇个菌液送测序最简单快捷了，

4 回答866 围观

问悬浮细胞转染

土井挞克树

可能是存在样本降解出了这一个条带，或者其他杂质污染了。

3 回答354 围观

问抗体动态性研究

土井挞克树

最有效的是质谱法和免疫印迹，可以区分不同抗体的动态性差异

3 回答328 围观

问活化的caspase3切割完底物后自身会降解吗

土井挞克树

会被降解，但是一般建议外部添加，可以干净消耗。

4 回答475 围观

问胞膜GABA受体染色

龙大人驾到

要观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布，可以尝试以下几种实验设计：1. 免疫荧光染色：使用特异性的抗体标记GABA受体，在细胞水平下观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布情况。可以使用荧光探针或荧光标记的抗体等方法进行检测。通过共聚焦显微镜等技术观察荧光信号的分布情况。2. 膜蛋白分离：使用细胞膜蛋白分离试剂盒等方法，将胞膜和胞浆分离。然后使用Western blot或免疫印迹等技术检测GABA受体在胞

4 回答501 围观

问生物学转录组测序请教

土井挞克树

只能根据生鱼片的图形去找可变剪接符合大的那个转录组，如果想要确定必须要测序。

3 回答493 围观

问关于Raw263.7巨噬细胞极化问题，加LPS后，如何判断诱导其向M1型极化成功了呢？

土井挞克树

需要加细胞因子，然后观察m1分泌蛋白的分泌情况判断

4 回答2255 围观

问WB蛋白在37到45范围内用哪个浓度的分离胶分离比较合适?

你猜猜乌鸦座

一般蛋白分子量在20-60kDa之间选12%的分离胶

6 回答1423 围观

问组织芯片做多重免疫荧光如何避免组织脱离?

土井挞克树

脱蜡前进行水化，可以防止组织脱离

3 回答545 围观

问多重免疫荧光为什么会飞片?

loveliufudan

造成多重免疫荧光飞片的原因有以下几个方面：治疗组织不当：在制备组织样本时，固定和处理组织的方法和条件可能会影响组织的完整性。如果组织未能充分固定或处理不当，组织结构会受到破坏，导致组织容易脱落。贴片不当：在贴片时，如果载玻片上的组织样本未能均匀涂布或压实，样本就会容易脱落。此外，如果载玻片表面存在污染或未经适当处理，组织样本的附着力也会受到影响。洗涤和染色条件不当：在染色和洗涤过程中，如果使用过于

3 回答464 围观

问感受态细胞转化时，热激时间可以引导入的DNA大小进行调整么？还是在60秒到90秒就可以

龙大人驾到

感受态细胞转化时，热冲击的时间是非常重要的，它能影响DNA片段的渗透和稳定性，从而影响到细胞转化效率。一般来说，热冲击的时间应该在60秒至90秒之间。这个时间范围内，热冲击可以促进DNA片段的进入细胞，但如果时间过久，则有可能导致DNA片段的降解和稳定性下降，从而对细胞转化效率造成不良影响。此外，DNA的大小也会影响细胞转化效率，较小的DNA片段通常比较容易进入细胞并被稳定地表达。因此，在进行感受

6 回答2623 围观

问FITC-Dextran做抗原吞噬细胞的原理是什么呀

土井挞克树

FITC-Dextran具有抗原呈递功能，还可以被特异性识别。

3 回答1860 围观

问有哪些数据库记载了IG基因家族的详细分类分类与功能？

土井挞克树

IMGT，国际免疫遗传学数据库，这个数据库可以查询

3 回答477 围观

问WB实验做出来pERK比ERK高，且两者水平变化相一致，内参是齐的，是什么原因呢

土井挞克树

因为pERK的抗体结合力特别高，totalERK的结合力很低。

4 回答723 围观

问免疫组化标本突然大量脱片

沫子大大

大量脱片问题考虑你的试剂浓度是否合适，同时你的载玻片有没有问题，普通的载玻片需要度明胶，也可以直接买黏附性的载玻片，贴的时候不要弄反。

5 回答739 围观

问请问各位前辈，请问LY294002溶液如何配置呀,是先用DMSO配成母液然后再加吐温80，PEG300和水稀释吗？

huarenqiang5

先用100%DMSO溶解，然后用的时候1000倍稀释灌流。

4 回答630 围观

问各位大佬，胫骨怎么提取rna啊。

huarenqiang5

可以借鉴以下步骤和方法：小白鼠6只，雄性，4周龄，体重20-30 g。采用脱颈法处死，迅速解剖剥离双侧胫骨组织，用生理盐水冲洗干净，放于液氮中保存。1.骨RNA提取第一组(对照组):随机称取25 g的骨组织3份，在标准条件下用传统Trizol法一步裂解，氯仿纯化、异丙醇沉淀、乙醇再纯化，干燥后得到3份RNA沉淀，每份加入10uL DEPC水溶解。第二组(改良组):随机称取25g的骨组织3份放入2m

4 回答892 围观

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