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科研学霸天团，48小时有问必答

问ALP标记抗体方法步骤？

土井挞克树

流程：过碘酸钠氧化-乙二醇终止-加入抗体-碳酸盐透析-硼氢化钠还原-硫酸铵沉淀-溶解透析。

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问在反转录制备cDNA的第一阶段，加入引物和模板RNA以后，需要65°℃变性处理5分钟，有什么作用？为什么？

juyue2010

主要是为了打开RNA中的二级结构，产物引物于模版结合

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问免疫印迹单组分TMB沉淀型显色液

loveliufudan

单组分TMB显色液是一种常用的酶标记试剂，可以用于检测Western blot和ELISA等实验中的蛋白质。使用单组分TMB显色液在膜上显示的条带较浅，可能是由于显色液的浓度不足、显色时间不够长等原因造成的。为了获得更深的显色效果，您可以尝试以下方法：增加显色液的浓度：可以尝试增加单组分TMB显色液的浓度，但需注意不要过度稀释，以避免背景杂色增加。延长显色时间：可以延长显色时间，但不要过度延长时间

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问请问乙型溶血性链球菌在哥伦比亚血平板中培养超过24小时会发生自噬吗

huarenqiang5

乙型溶血性链球菌在血平板中培养超过24小时一般都会发生自噬。

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问细胞油红O染色一定要做成爬片吗

huarenqiang5

不是必须要进行爬片，但是建议进行爬片，因为直接在板里染板的话可能会导致染的不均匀，而影响观察从而导致结果有误。

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问IF用于小鼠的一抗是否能用于大鼠

此用户已注销

抗体-抗原有着严格的耦合性，小鼠的用在大鼠实验中，理论上是可行的，不过实验结果还是有待验证。比如剂量问题，有没有效果，甚至会不会有免疫反应，都要进行严格验证。

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问抗体纯化后的甘氨酸需要去除吗？甘氨酸的影响大吗？

是TTT

抗体纯化后的甘氨酸需要去除，甘氨酸的影响倒是不大，但是一般都会进行洗脱去除

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问幽门螺旋杆菌的培养使用配套培养基还是自己配比较经济实惠？

那兔那兔

配套的成功率高点，自己做的话比较麻烦，万一不成功还得重来

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问组织切片可以观察到生物发光吗?

balalaLy

生物发光一般活体可以观察，动物内部脏器或者想要观察局部细胞的情况也可以将局部组织取出或做成切片。这个跟你使用的发光材料有关。

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问已知酶怎样查找相关基因？

loveliufudan

如果您已经知道某个酶的名称或序列，可以使用以下几种方法来查找与该酶相关的基因：基因数据库搜索：可以使用各种基因数据库，如NCBI、Ensembl、UCSC Genome Browser等，来搜索与该酶相关的基因信息。在数据库中搜索时，可以输入该酶的名称或序列信息，以查找与之相关联的基因信息。基因家族搜索：如果已知该酶属于某一特定的基因家族，可以使用各种基因家族数据库，如Pfam、InterPro等

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问各位大佬，胶体金半定量检测原理是啥啊

loveliufudan

原理是基于胶体金颗粒与抗体之间的特异性反应，在检测过程中，通过检测胶体金颗粒的颜色变化来判断目标蛋白质的相对含量。具体操作方法如下：制备胶体金颗粒：制备具有一定大小和形状的胶体金颗粒，并表面修饰特定功能基团的化学物质。包被抗体：将特异性抗体与胶体金颗粒表面的功能基团进行反应，包被抗体。准备标准曲线：用已知浓度的标准样品制备一系列浓度不同的标准曲线，作为半定量测定的参照。加样：加入待测样品和标准曲线

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问关于多转录本PCR

loveliufudan

如果您已经优化过反应条件，但仍然出现多条带或无法扩增出全长片段，您可能需要考虑以下几点：引物设计：确保引物的特异性和合适的长度、浓度和退火温度。PCR条件优化：尝试优化PCR反应条件，例如，反应体系、退火温度、扩增循环数等，以提高扩增效率和特异性。产物纯化：进行PCR产物纯化，如凝胶回收或其他柱式纯化方法，以去除杂质并提高产物纯度。转化策略：如果您无法扩增全长片段，您可以考虑使用多段扩增、基因组编

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问提pbmc做流式胞内染色，刺激5小时后贴壁细胞消化不下来

loveliufudan

可以考虑以下几个方面来解决问题：调整胰酶浓度和消化时间：尝试使用不同浓度的胰酶和不同的消化时间，以找到最佳的消化条件。尝试其他消化酶：胰酶可能不是最适合消化PBMC的酶，您可以尝试其他消化酶，例如，Trypsin-EDTA、Collagenase、DNase等。使用细胞分离液：使用细胞分离液可以更加有效地分离PBMC，并消化贴壁细胞。常用的细胞分离液有Ficoll-Paque、Histopaque

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问求助巨噬细胞提取的一些问题

loveliufudan

在进行腹腔巨噬细胞的提取时，选择雌性小鼠的原因是由于雌性小鼠在生理周期上的变化会对腹腔巨噬细胞的数量和活性产生影响，因此在一些实验中选择在同一周期的雌性小鼠进行提取可以减少实验误差。此外，由于雄性激素可能影响巨噬细胞数量和功能，因此雄性小鼠在一些实验中不常用于腹腔巨噬细胞的提取。具体来说，雌性小鼠在生理周期的不同阶段，腹腔巨噬细胞数量和活性会发生变化。例如，雌性小鼠在发情期和妊娠期时，由于激素水平

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问组织脱水后有凹陷，部分切片镜下有发散的感觉，大小组织都有这种情况，脱水程序如下会是什么原因如何解决

loveliufudan

可能的原因：组织脱水不充分或时间不够，导致残留液体在脱水后形成凹陷和发散感。解决方法：对于脱水不充分或时间不够的情况，可以增加脱水时间和浓度，并且确保每个步骤的时间足够，同时确保脱水时组织浸润充分，以便组织内的液体充分被脱出。另外，如果组织切片时出现凹陷和发散感，可以尝试在石蜡浸润前进行压片处理，以便使组织均匀压平，并避免在脱水和包埋过程中出现空洞和气泡。同时，在包埋时，也要确保组织均匀包裹在石蜡

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问荧光素酶的发光是否需要激发光？

EnoshHuang

有荧光素底物就行，不需要激发光

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问人巨噬细胞标记

土井挞克树

流氏测人巨噬细胞是可以用CD11b CD68共标的

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问粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

sswei

可能就是RNA提取过程中出问题了，可以先用提取的RNA跑一下胶。

3 回答156 围观

问求助，科研

loveliufudan

LC2细胞（Lung type 2 innate lymphoid cells）是一种新发现的免疫细胞，其分离和培养方法尚不是很成熟。目前，LC2细胞的分离主要依靠免疫细胞分选技术，如磁珠分选、荧光细胞分选等。这些方法可以利用特异性标记的抗体识别和分离LC2细胞。关于LC2细胞的培养，由于这种细胞是一种新发现的免疫细胞，其生物学特性和培养条件还需要进一步研究和优化。目前，研究者们正在尝试使用不同的

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问请问怎么查看th0活化成功与否？

loveliufudan

在进行包板过程时，需要注意以下几点：充分洗涤酶解过的包板：在使用新的包板之前，需要充分洗涤酶解过的包板，以去除任何可能存在的残留物质，防止对实验产生影响。确保包板浓度正确：包板浓度过高或过低都会影响细胞的激活，一般建议使用厂家推荐的浓度。在使用时，可以根据实验需要进行优化和调整。培养板质量问题：细胞培养板的质量也可能影响细胞的激活和诱导分化。建议使用无菌、无毒、无蛋白质吸附的高质量细胞培养板，并在

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