dxy_yzlp1qx5
3.5cm和6cm皿都做过,3.5cm皿质粒用量2.5μg,6cm皿4.3μg,DNA-磷酸钙沉淀物静置20min加入细胞,48h收细胞,3.5cm做的时候24h收的细胞。wb做出来这次是这种质粒表达少,下次可能是另一个,都是相同的操作一起做的,请问是出了什么问题?或者为了保证最后各质粒转染后表达量差不多有什么注意点吗?
loveliufudan
可能是因为质粒的质量不同导致的。质粒质量不同会影响质粒在转染过程中的效率,从而导致最后转染后表达量的差异。
为了保证最后各质粒转染后表达量差不多,可以采用以下措施:
1.使用相同的质粒质量,并在转染前进行纯化。
2.使用相同的质粒转染量。
3.在转染过程中保持温度、时间等操作条件的稳定性。
4.检测每个质粒的转染效率,并根据效率调整转染量。
5.在收细胞时间上统一。
6.对每个质粒进行正确的控制质粒。
huarenqiang5
转染质粒的种类、大小、剂量及转染细胞浓度都会影响转染质粒报告基因表达。
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