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做ip实验的时候,input组输入的目的蛋白为双条带,但是!ip组拉下来的蛋白为单条带!在同样的目的蛋白位置。IgG组都是空白。
请问这种情况会是因为蛋白的同源异构体吗?
百泰派克-李工
在免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)实验中,如果在input(输入)组中观察到目标蛋白为双条带,而在IP组中只拉下单条带,可能是由于:
1、蛋白修饰:
在Input组中,目的蛋白可能存在不同的翻译后修饰形式(如磷酸化、糖基化等),导致电泳迁移速度不同,形成双条带。而在IP组中,可能只有一种形式的蛋白被特异性抗体识别并沉淀下来。
2、蛋白降解:
在Input组中,双条带可能是由于蛋白的部分降解。而在IP过程中,由于抗体的特异性结合,可能只拉下了未降解的完整蛋白,导致只出现单条带。
3、实验条件:
IP实验条件(如洗涤、结合等步骤)可能导致某些形式的蛋白丢失。例如,较弱结合的蛋白在洗涤过程中可能被洗脱。
4、抗体特异性:
使用的抗体可能只与目的蛋白的某种特定形式结合,从而在IP组中只检测到单条带。
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