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        某个基因已经敲除了,理论上蛋白没有表达,为什么还能拉下来蛋白

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        实验室小助理夏奇

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        可能是抗体特异度差,将杂质的结合误认为目的蛋白

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        loveliufudan

        有帮助

        如果一个基因被敲除,理论上来说该基因编码的蛋白质不会再被合成和表达。但是在某些情况下,即使基因已经被敲除,仍然可能观察到该蛋白的存在。这可能是由于以下原因:

        抗体的特异性:如果使用的抗体具有交叉反应的特性,即抗体不仅能够识别目标蛋白,还能与其他蛋白结合,那么就可能拉下非目标蛋白,导致在 Western blot 或者其他检测方法中观察到类似目标蛋白的条带。

        基因敲除不完全:在基因敲除实验中,有可能出现基因敲除不完全的情况。即使敲除了目标基因,也有可能留下一些残留的基因片段或者突变,这些残留的基因片段或者突变可能会导致蛋白质的表达。此外,还有可能存在基因剪接变异、启动子活性调节、转录后修饰等因素,导致蛋白质的表达不受基因敲除的影响。

        其他污染物的存在:在免疫共沉淀 (Co-IP) 实验中,有可能存在其他蛋白质、核酸、细胞碎片等污染物,它们可能会与实验中使用的抗体结合并被拉下,导致在 Western blot 或者其他检测方法中观察到非目标蛋白的条带。

        user-title

        赛默飞世尔科技

        有帮助

        可能您的基因敲除的没有完全敲除干净。如果之前只用RT-PCR检测敲除效果可能由于循环数低没有扩增出来,但是可能还是有一定表达的

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