土井挞克树
ig G条带很浓可能是抗体特异性差的原因,建议更换特异度高的抗体
loveliufudan
在免疫共沉淀(Co-IP)实验中,出现IgG有很浓的条带的可能原因包括:
抗体过度交联:在进行Co-IP实验时,如果交联反应条件过于严格,可能会导致抗体间过度交联,从而使IgG抗体自身形成多聚体,产生与目的蛋白一样大小的条带。
洗涤不彻底:在进行Co-IP实验时,洗涤步骤可能不充分,导致样品中残留较多的IgG抗体,从而在Western blot检测中出现很浓的IgG条带。
共沉淀的非特异性蛋白质:在样品中可能存在一些非特异性的蛋白质,这些蛋白质可能会与IgG抗体结合,从而产生很浓的IgG条带。
赛默飞世尔科技
在实际操作的过程中很难避免一些非特异性条带,要看条带的位置,如果条带位置正好是抗体轻重链,且该位置在input组没有,IP组有,是有可能的。可以通过多次漂洗,使用磁珠代替琼脂糖等办法,看看是否可以改善现有问题
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