表达蛋白发现偶尔在上清偶尔在沉淀，这个问题怎么解决，这几次纯化的效果都不好？

建议如果用镍柱来纯化蛋白的时候，纯化的过程纯化之后的溶液当中适当的加一点EDTA，让它螯合脱落下来的镍离子，减少重金属对蛋白的伤害

可以加点分散剂，避免蛋白质分子接触碰撞，减少它的聚集，这些分散剂，比如说甘油，聚乙二醇，甘露醇，还有这个山梨醇之类的。

每次表达蛋白，所有的条件必须一致，否则你也不知道问题出在什么地方。

是不是用的柱子太久了，不太好用了，有可能是这样我们也有过这种情况，换个新柱子