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问
昆虫抗菌肽的提取与分离纯化的步骤和所需的仪器耗材
明査日月
原料制备、组织匀浆、免疫诱导、粗提液热处理、提纯和抗菌活性测定
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问
大佬们,请问我跑了好几次,看着maker挺好,但是样本条带就是显不出来,这是样本纯度问题吗
秋秋欣欣
样本条带不清楚也可能是你的样本浓度低
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问
wb出问题了
土井挞克树
可能是非特异性结合,或者你的样品中有蛋白酶
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问
两个相同的样品,放到不同的泳道,GAPDH孵育出来一个有一个没有,反而底下半厘米有
bamboopiggy
1.你样品降解了,2,抗体可能加的不匀,
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问
bca蛋白定量法
土井挞克树
不建议用,对实验结果影响太大。
4 回答
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问
制胶关键点,是否可以使用无水乙醇消除小气泡
balalaLy
水、乙醇、异丙醇都可以用,其实效果都差不多
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问
时间点多组别如何跑WB 如何统计
bamboopiggy
可以分几块胶跑,但是最好每块胶上有一个共同的对照,然后数据处理的时候,用这个对照进行normalize
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问
WB上样孔设计
土井挞克树
可以按照顺序,先把具有治疗作用的放在1.2然后是对照。这样内参显示的好
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问
想咨询一下各位大佬,从植物中提取的蛋白多肽怎么能提高它的浓度了,
土井挞克树
会破坏蛋白结构,不建议这么做。
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问
血清中除了葡萄糖和甘露糖,其他糖的水平是不是很低
土井挞克树
半乳糖可以测,但是半乳糖胺这个应该是代谢中产物,测不到
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问
WB实验显影条带中间一大片空白咋回事啊
NatureBios
这种结果应该为转印时,分离胶和Nc或pvdf膜没有贴合好,蛋白没有转印到膜上
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问
用的BioChrom血清养的HepG2成这样,这是不是染菌了?还是血清问题或是细胞不行了?
bamboopiggy
你这个hepG2 应该是支原体污染的,正常的hepG2不长这样,要小,要圆,并且扎堆。
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问
Western
此用户已注销
兔心脏做western blot,取组织后可以先放负20吗、第二天再放负80
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363 围观
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问
marker跑胶弥散
balalaLy
有可能是marker降解了,看看跑出来的蛋白有没有弥散,如果也有的话就是电泳液的问题。
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2002 围观
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问
PCR和WB显示两条siRNA干扰效率差不多,为什么圈出来的部分差别这么大(如图:两个细胞系都是这样)?
balalaLy
单独看核内的干扰效果si1是比2要弱的。胞浆的条带你看那个内参也是有差别的,就凸显了si2的干扰效果。
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605 围观
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问
wb浓缩胶跑了120v对结果有影响吗
此用户已注销
你这种情况问题应该不大、跑胶,进胶的电压维持在120V左右最好,浓缩胶的电压在90V左右,分离胶的电压在120到150之间
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2081 围观
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问
磷酸化和总蛋白变化趋势一致
土井挞克树
老外的文章,总蛋白和磷酸化蛋白一般都会做WB。对结果的解读,以下意见,供参考:(1)内参一致,总蛋白不变,磷酸化蛋白表达升高或者降低:说明经过某种处理(外部操作,抑制剂,上游蛋白基因敲除或者siRNA等)后,对该蛋白(及其代表的信号通路)的活性产生影响(促进或抑制);(2)内参一致,总蛋白升高或者降低:说明经过实验组的处理方法能够诱导总蛋白的表达或者降解。至于磷酸化活性的变化,和总蛋白的表达高低有
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8452 围观
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问
WB核蛋白和胞浆蛋白可以分开跑吗还是必须在一块胶上面跑哇
土井挞克树
可以分开跑,W B实验相对来说操作自由度高。
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487 围观
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问
WB上样量从18-60ug内参都非常浅(中性粒细胞)?
bamboopiggy
感觉还是你中性粒细胞裂解不够的问题,你增大一下裂解液的体积看看,尽量减少沉淀,然后再做wb
4 回答
449 围观
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问
WB转膜结束后25kd以下的地方总出现粉红色染料印记,请问是怎么回事?另外如何提高心脏组织蛋白提取质量?
土井挞克树
有可能是抗体交叉反应,说明抗体纯化不足。
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388 围观
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