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        WB转膜结束后25kd以下的地方总出现粉红色染料印记,请问是怎么回事?另外如何提高心脏组织蛋白提取质量?

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        月夜踏马

        各位战友,我的目的蛋白是19kd的,我用心脏组织跑了好几次,都跑不出来,条带很丑(每个泳道都是V字型,而且每次转膜后在25-35kd以下的地方都会留下形态不规律的染料印记),我用的是弗德的5×loading buffer。今天用体外心肌细胞和组织跑了一次(同一张PVDF膜,一样的操作和条件),细胞的结果就很好。我师兄说是因为组织提蛋白本来就杂质多比较脏,

        想请教广大战友加几个问题:①如何提高提心脏组织蛋白的质量;②转完膜之后,每次在25kd以下的位置都会出现相似的不规则染料印记(我用的弗德的5×loading buffer),是怎么回事?查阅弗德的说明书,说是双色染料,这种粉红色的染料应该叫“派洛宁y”

        附上我今天跑的WB,一个19kd的蛋白,第一个是组织的;第二个是心肌组织电泳转膜并剪膜时候的条带(marker为15和25kd);第三个为细胞的

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        5 个回答

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        土井挞克树

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        有可能是抗体交叉反应,说明抗体纯化不足。

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        junyong151

        有帮助

        可通过改变组织研磨方式,更换质量更好的蛋白抽提试剂及裂解液,使用更好的试验器材等方式来提高心脏组织蛋白提取质量。

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        bamboopiggy

        有帮助

        这个说白了,还是你组织的蛋白浓度有点高,你再稀释一倍试试。只要留在膜上的染料的颜色,对wb显影没有影响,你不用管它。

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        NatureBios

        有帮助

        组织样本,尤其肌肉样本,如师兄说的杂质比较多,而且还容易研磨不充分,所以在提蛋白时我们研磨充分一些,loading buffer沸煮取上清,上样的时候也离心一下再上样

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        balalaLy

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        有些双色的loading buffer就是这样的,显影一般不会有影响。要不就换一种loading buffer吧

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