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PCR和western blot差异表达求助
genecreate
q PCR和WB不一致的现象很常见。mRNA到蛋白质之间有多个调控环节
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问
WB背景较深,非特异性杂带很多,科研小白求助各位大神!
wildC8OG
延长封闭时间,降低一抗浓度,增加二抗浓度
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问
急求园内大佬,有没有人做过活性氧流式的,请问一下数据怎么处理啊?
土井挞克树
双峰就是有的细胞染上染料了,有的没有染上所以双峰..
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问
弯弯的蛋白胶是咋回事捏
balalaLy
凝固时间太久太干了,或者跑胶的过程受热了
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问
Wb制备分离胶有问题,想请教一下大佬!
土井挞克树
15kd选用12%的胶就可以。
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问
wgs检测
此用户已注销
华大基因三到五天就可以查结果。
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问
CoIP选用什么蛋白标签比较好,为什么?蛋白标签的碱基序列是什么?
汤姆卜丽波
比较常用的有Flag标签,序列是(DYKDDDDK )
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问
內源性coip最少细胞用量与最大细胞用量,细胞量太大会不会造成非特异性结合
NatureBios
CO-IP的样本量会根据蛋白丰度有些偏差,做wb,通常细胞数量在10的六次方以上,定量后每个泳道20ug样本,非特异情形可以先用磁珠protein A处理下样本,再开始往下做
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问
蛋白免疫印迹常用的标签有哪些?如何选择?
NatureBios
标签有HIS HA FLAG GST GFP RFP mCherry等会在蛋白表达时插入到表达体系中,Western blot常用的内参有actin GAPDH Tubulin,针对样本核浆膜提取的样本,也有相应的蛋白做内参
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问
流动性中有的有机溶剂是色谱级的还需要过滤和超声吗? 超纯水机出的超纯水有电导率显示,需要过滤和超声吗?
徐彩云6
样品溶液亦必须用0.45μm的微孔滤膜过滤后才能进样。
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问
二抗用Fc包板还是Fab包板的效果不同,是什么原因?
此用户已注销
Fab段包含完整的可变区,以及恒定区的CH1区域。Fc段仅指Ig恒定区CH2和CH3的区域,相当于Y字结构下面那一部分。
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问
待测样品在进行ELISA检测中进行梯度稀释,测得的吸光度值如何转用IC50值的图表显示?
dxy_n1mn00tr
用测得的吸光度值,和浓度一一对应,作出模拟曲线,得出线性关系,就可用线性曲线方程得出IC50值。
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问
ELISA实验可以使用1%的明胶溶液做封闭液吗?,明胶可以做抗体稀释液吗?
徐彩云6
明胶可以做稀释液,其配制方法是:明胶0.1g+洗涤液100ml。
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问
求助| GST标签目的蛋白难吸附上beads怎么办?吸附效率低怎么办?
此用户已注销
可能原因1:洗脱缓冲液的体积太少 解决办法1:增加洗脱缓冲液的体积。 可能原因2:洗脱缓冲液的pH过低 解决办法2:调节洗脱缓冲液pH值至8-9 。 可能原因3:洗脱的时间不够 解决办法3:增加洗脱缓冲液与磁珠反应的时间。
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问
WB上样到60ug内参还是很浅,目的条带出不来
土井挞克树
你把可能性基本都排除了那就是细胞的问题
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问
有没有做过慢病毒转染thp-1细胞构建敲低稳转株?跪求指导?
徐彩云6
你这个需要离心后才能进行下一步操作
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问
western blot蛋白凝胶电泳
huarenqiang5
实验方法、步骤、保存等方面都可以,应该能行
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问
求问Sf9细胞表达
汤姆卜丽波
可能是你的荧光蛋白选择有问题,也可能是合成时它与目的蛋白的位置导致目的蛋白被折叠不表达或者被切割
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问
请教各位为什么我的Bcl-2显影有两条带?
balalaLy
正常是只有一条带的,可能是抗体反复冻融的原因
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问
蛋白制样的抗氧化剂和loading放在-20℃冻了三天,还能用吗?
徐彩云6
能用,因为在-20度可以放7天左右,超过7天就保存在-80度,
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