western blot蛋白凝胶电泳

在一个固定的点缓慢地加入胶，在胶凝固之前不要移动位置。加交叉梳子不要有气泡，然后加入蛋白样品，盖上盖子检查正负极，恒压100v大约跑90分钟，提前用undefinedBuffer浸泡NC膜，胶泡好后，小心的撬开玻璃板，把多余的胶切掉，三明治的顺序是黑色一面-海绵-滤纸-胶-NC膜-滤纸-海绵-白色一面，插入清洗过的电泳槽，倒入undefinedBuffer，倒入百分之五脱脂奶粉封闭一小时。(一抗孵音)将膜放入自封袋中，加入抗体，4度过夜，室温摇床用undefinedTBST洗膜三次，(二抗孵育)百分之三的脱脂奶粉，将显色剂均匀滴加于膜上，反应五秒，放入暗盒中盖上暗盒曝光3-5秒，红灯下观察至条带出现。