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WB背景较深,非特异性杂带很多,科研小白求助各位大神!

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_03ip9wor

最近在跑一个多克隆抗体(这个指标目前只有多克隆的,没有单克隆的),且这个抗体是一个泛素化连接酶。

WB条带如下:

所用一抗浓度是1:1000,用的TBST稀释

封闭10%脱脂牛奶2h

求助各位大佬:

1.这种指标在制备蛋白样品时需要注意什么吗?

2.对于这种杂带有什么改进意见呢?

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3 个回答

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wildC8OG

有帮助

延长封闭时间,降低一抗浓度,增加二抗浓度

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juyue2010

有帮助

一抗稀释不够,浓度太大,适当延长封闭时间,降低1抗浓度

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土井挞克树

有帮助

杂带太多与稀释液有关系。可以用5% 脱脂奶粉封闭,一抗浓度:1.0 mg/mL,溶于 5% 脱脂奶粉和 0.5M NaCl。

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