实验问答22,209,057 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问Elisa实验中，结果空白背景高，一般是什么原因？

huarenqiang5

常见原因如下：1）洗板不干净；2）显色液变质或者试剂过期；3）试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；4）蒸馏水受酶等污染；5）试剂混用；6）培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

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问想问一下大佬们，我要测一个放线菌的分泌蛋白的表达量，

sswei

可以采用散射比浊法来测定分泌蛋白的量。

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问在测量多糖中蛋白质含量时，是否可以使用BCA测量，对比使用Bradford法哪种方法更适合，为什么？

loveliufudan

BCA和Bradford法都是常用的蛋白质测量方法，但是它们对多糖的干扰程度不同。通常情况下，多糖会干扰Bradford法的测量，导致高估蛋白质含量。而BCA法对多糖的干扰相对较小，更适合测量多糖中蛋白质的含量。因此，如果需要测量多糖中蛋白质的含量，建议选择BCA法进行测量。但是，如果待测样品中没有多糖的干扰，Bradford法也可以使用。需要根据具体情况选择合适的方法。

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问western blot免疫印迹实验，目的带很弱，要怎么加强

土井挞克树

增强上样浓度和上样量，延长一抗孵育时间

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问Elisa实验中无法检测出弱阳性质控的样本，是由于什么原因造成的？

loveliufudan

可能有以下几个原因：抗原过少：如果样品中的抗原浓度过低，可能会导致无法检测出弱阳性结果。在这种情况下，可以尝试增加样品的浓度或者使用更敏感的检测方法。洗涤不彻底：洗涤步骤是Elisa实验中非常重要的一个环节，如果洗涤不彻底，可能会导致样本和检测试剂之间的非特异性结合，从而产生高背景信号，影响结果的准确性。建议仔细检查洗涤步骤是否正确执行。抗体浓度不足：如果使用的抗体浓度过低，可能会导致检测的灵敏度

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问Wb上样浓度应该选择多少？

balalaLy

应该是看蛋白量吧，一般20ug总蛋白就可以了

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问Western blot 总是出现固定的一条强杂带

balalaLy

有些抗体会出现杂带是正常现象，但是你这个普遍都有而且位置差不多，应该就不是一抗的问题，换一个二抗试试

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问最近遇到了小鼠免疫问题

huarenqiang5

主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间，从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

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问酶放大免疫实验技术

huarenqiang5

荧光标记技术：是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。

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问Wb显影结果很糊是什么原因啊？

土井挞克树

抗体特异性差的原因，造成了非特异性染色，建议更换特异性高的抗体

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问wb跑胶的时候内槽的电泳液老是漏是怎么回事？

土井挞克树

漏液多是因为电泳槽老化密闭性差的缘故，建议更换电泳槽

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问做wb的时候，全膜可以一起孵育抗体吗，怎么稀释抗体？

土井挞克树

可以一起孵育抗体，在不同的区域，不会互相影响

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问为什么ip之后要跑胶做银染呢？

loveliufudan

在免疫沉淀（IP）实验中，我们使用抗体将目标蛋白质与其相互作用的其他蛋白质一起沉淀下来，然后通常需要对沉淀物进行分析以确定哪些蛋白质与目标蛋白质发生了相互作用。这个分析的方法通常包括Western Blotting（WB）和银染分析。银染和WB的最大区别在于它们使用的检测方法不同。WB主要通过特定的抗体来检测目标蛋白质及其相互作用的其他蛋白质。而银染则是通过银离子化学反应的方式，将沉淀下来的蛋白质

4 回答4609 围观

问southern blot应该如何定量？

huarenqiang5

用含溴化乙锭的1%琼脂凝胶电泳法测定，根据加入标准品片断的电泳迁移距离计算样品片断分子量大小。

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问不知道WB中这些斑块产生的原因和解决办法，求

Luckybabygirl

看起来特别像加样时样本飘了的痕迹，但出现在最终的条带上，可能是有气泡正好在那个位置，那就下次记得把气泡赶走。如果是第一次跑，可以在分析下上样量以及其他问题，多试试

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问乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法

土井挞克树

除了化学法，还可以做免疫荧光实验，看抗原的表达强度，来检测阳性的强弱

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问Marker没有完全转上，这是什么原因？！！！有一部分在胶上

天一湖医者

首先排除Marker自身问题.你的Marker是否是点在最边上的泳道? 如果在最边上有可能是你的滤纸比膜小, Marker那里没有闭合导致的. 或者边缘位置的膜和胶没贴紧,有气泡, 所以转不过去. 你把Marker点在中间位置看看情况.

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问ELISA操作咨询各位前辈

sswei

ELISA中加样须注意如下问题：　　1.吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确!　　2.不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确!　正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：　　1.角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确!　　2.吸头应当贴着管壁和液面的

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问蛋白质免疫印迹实验为什么要蛋白质还原和变性

loveliufudan

蛋白质免疫印迹实验中的蛋白质样本还原和变性是为了使其线性化并暴露出可被抗体识别的特定蛋白结构，这样可以提高抗体的特异性和亲和力。还原是指还原性试剂（如二巯基乙醇）将蛋白质中的二硫键还原成单个硫原子，使其变为线性状态。这对于有多个二硫键的蛋白质尤为重要，因为二硫键交联的结构会使蛋白质失去线性性和空间构象，从而影响抗体的结合效率和特异性。变性是指蛋白质在高温或有机溶剂等条件下发生的结构变化，使其失去原

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问WB实验中总是在目标条带下面还有点细细的小条带，不知道如何去除？留着很丑。此外，目标条带，分析软件哪个更好？

sswei

可以采用以下方法去除小条带:1、更换一抗，换单克隆的。2、不换一抗，降低一抗稀释比，这样目的条带会变弱，不过杂带也会，有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。

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