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问
请问一下师兄师姐wb目的蛋白可以在不同时间段收吗
土井挞克树
可以的,时间是根据实验而定的。
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问
【窒息法诱导大鼠心脏骤停-心肺复苏模型求助】
土井挞克树
你可以减少窒息诱导时间,在小鼠出现室颤发时候进行复苏,不一定需要四分钟
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问
southern blot化学发光检测,背景太强,但斑点无信号
balalaLy
你要探索最佳的使用浓度也得按照完整的protocol来,杂交和封闭都是必要步骤,不能省略。
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问
实验求助‖毛状根诱导
土井挞克树
早期是需要另外添加激素的,不然诱导不容易成功
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问
高效液相色谱待测样品浓度确定
Dr_劉医生
在高效液相色谱中,可以通过内标法来确定待测样品和对照品的浓度是否适合检测。内标是已知浓度的化合物,它与待测样品一起进入色谱柱进行分离。在分离后,可以通过内标的峰面积与待测样品的峰面积之比来计算待测样品的浓度。另外,对照品浓度与峰面积之比等于样品中浓度与峰面积之比,由此可以计算出样品的浓度。
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问
免疫共沉淀 igg组和ip组阳性 input组阴性
行内顶尖人才
楼主这个问题解决了吗,条带位置在哪里,虽然使用了避免轻重链的二抗,如果没有目的蛋白也会将轻重链曝出来。我的input组一直没有条带,楼主咋解决的啊,万分感谢
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问
空白组也出现了flag标记怎么回事
sswei
试样中除待测组分外的其它组分的干扰。
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问
wb条带连着怎么回事?用同样的胶跑其他抗体就好着。大佬们,能不能帮我看看啊?
loveliufudan
可能是以下两个原因造成的:过量载入样品:过多的蛋白质样品可能会导致过多的条带出现在同一个区域。可以尝试减少载入量。抗体特异性问题:抗体可能会交叉反应多个蛋白质,导致出现多个条带。可以尝试使用更具特异性的抗体或者对抗体进行再验证。
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问
质粒转入DE3感受态细胞中菌液PCR总是没有条带?
loveliufudan
可能有以下几种原因:质粒转化效率低:转化的效率低可能导致在菌落PCR检测中出现假阴性结果。您可以尝试重新制备感受态细胞,注意细胞的生长状态和转化的时间等因素,确保转化效率足够高。质粒没有正确复制:感受态细胞内的大肠杆菌染色体和质粒的DNA竞争复制的情况下,质粒可能无法正常复制,导致质粒的拷贝数不足,PCR检测不出条带。您可以尝试使用一些复制更高效的质粒或增加抗生素筛选压力来提高质粒的复制数。PCR
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问
小鼠细胞的敲降慢病毒可以能用到大鼠细胞吗?
z流沙z
应该是不行,除非靶向的序列刚好一致性很高
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问
nih3t3嘌呤筛选浓度
z流沙z
puro浓度还是需要再稍微摸索一下,跟细胞状态有关。MOI也需要摸索一下,取决于病毒包装的效果
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问
慢病毒包装 转染48小时后细胞这是死了吗?293t细胞全变黄了,包装的时候该怎么改进啊
z流沙z
如果转染质粒量比较大,要求转染时的细胞密度比较高,这样子需要的培养基也比较多
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问
WB最近遇到了好多问题,求帮助!
z流沙z
1、配胶要充分混匀,没有杂质,样品要离心取上清,不要混有颗粒状物质或者细胞沉淀。2-3、小分子蛋白可以配高浓度如15%的胶,减少电泳和转膜时间,比如电泳80v 30min和120v 至分开即可,像你蛋白这么小的转膜200mA 1h完全足够
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问
慢病毒转染应该怎么准备?
是TTT
转染293细胞的话,准备好包装质粒,慢病毒质粒,转染试剂,按转染试剂说明书包装就行,48h收取病毒液离心,0.45um过滤头过滤,使用前加病毒增强剂。
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问
Coip input和ip组蛋白条带位置不一样是怎么回事?
土井挞克树
1、coip后蛋白条带会迁移是因为在高温的情况下蛋白质之间把对方分开而迁移。2、也可能是因为两个蛋白质有相互作用力。
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问
一抗选用tst3二抗选用那种抗体比较好呢?蛋白提取的是小鼠皮肤组织。
loveliufudan
建议使用兔源抗小鼠的二抗。兔源抗小鼠的二抗通常具有良好的特异性和亲和力,可以与一抗(tst3)较好地结合,并且可以被常见的检测方法如Western blot、ELISA等所检测到。此外,如果需要使用荧光标记的二抗,可以选择荧光标记的兔源抗小鼠二抗。如果需要使用酶标记的二抗,可以选择较常用的HRP(辣根过氧化物酶)标记的兔源抗小鼠二抗。需要注意的是,对于二抗的选择,最好选择与一抗不同源的抗体,以避免
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问
WB曝光后请问为什么会出现这种黑色条带(右边两组和该组样品为同种)
sswei
膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。
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问
蛋白质的量与分子量
balalaLy
蛋白质定量是看里面的蛋白含量,单位是ng/ul,蛋白分子量是指某一种蛋白分子质量
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问
请问WB检测细胞衰老,检测H2AX蛋白必须得用γH2AX抗体吗,H2AX抗体能出结果吗
loveliufudan
H2AX是一种组蛋白H2A的变异体,其在DNA损伤修复中扮演重要角色,而VH2AX是H2AX的磷酸化形式。在WB检测H2AX蛋白时,若只是想检测其总量,使用H2AX抗体即可;而如果想检测其磷酸化形式,则需要使用VH2AX抗体。在检测细胞衰老时,H2AX和VH2AX的检测均有可能用于该领域研究,具体使用哪种抗体需要考虑研究目的和实验条件。需要注意的是,H2AX磷酸化水平的检测通常是用于检测DNA双链
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问
WB活细胞样品放置过长有影响吗?
z流沙z
如果细胞有加培养基、pbs或者裂解液,全程都保持在冰上应该还行
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