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空白组也出现了flag标记怎么回事

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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冲冲小虾米

转染质粒里面给蛋白尾端标记了flag标签,结果使用flag抗体,发现空白组也有信号,想问问是怎么回事,需要怎么解决这个问题呢?

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5 个回答

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sswei

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试样中除待测组分外的其它组分的干扰。

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土井挞克树

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可能是空白组受到了污染,空白组背景中存在类似物质

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balalaLy

有帮助

应该是抗体不好,太多非特异性杂带

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z流沙z

有帮助

抗体特异性不好。首先样品要增加转染量和上样量,其次延长封闭时间,多洗膜,抗体可以用脱脂牛奶配制

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loveliufudan

有帮助

出现空白组也有信号的情况,可能是因为抗体结合了被转染细胞产生的内源性蛋白,或者是在转染过程中引入的其他蛋白。为了解决这个问题,可以尝试以下几种方法:

加入正常对照组:使用未标记的细胞作为对照组,比较标记和未标记细胞的信号差异,以确定是否存在非特异性信号。

使用另一种抗体:如果空白组也有信号,可能是抗体结合了其他蛋白。可以尝试使用另一种抗体,或者使用不同的二抗进行检测。

确认抗体浓度:可以尝试调整抗体浓度来优化信号的特异性。过高的抗体浓度可能会导致非特异性结合,从而引起假阳性结果。

确认转染条件:在转染过程中,可能会引入其他蛋白或产生蛋白交叉反应。可以尝试使用更纯净的转染试剂,并优化转染条件,以减少干扰物质的影响。


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