southern blot化学发光检测，背景太强，但斑点无信号

你要探索最佳的使用浓度也得按照完整的protocol来，杂交和封闭都是必要步骤，不能省略。

背景强考虑是非特异性结合的部分太多，建议更换特异度高的抗体。没有斑点可能是样本降解了，建议重新上样

对于您的第一个问题，探索生工合成的地高辛探针的最佳使用浓度，您所进行的实验方法是正确的。通常情况下，为了确定最佳的探针使用浓度，需要尝试不同的探针浓度，以找到适合您的样品的最佳浓度。

对于您的第二个问题，背景强而无斑点信号的主要原因可能有以下几个方面：

1.探针杂交条件：如果温度、时间和混合液的组成不合适，则可能导致背景信号增加，但斑点信号不增加。

2.抗体抗体条件：如果抗体抗体浓度、孵育时间或孵育温度不适当，则可能会导致背景信号增加，但斑点信号不增加。

3.缓冲液组成：缓冲液中的组分可能导致背景信号增加。您可以尝试调整缓冲液的pH值、NaCl浓度等参数。

4.底物问题：底物的稳定性和浓度可能对实验结果产生影响。您可以尝试使用不同浓度的底物或不同的发光底物。

主要原因:抗体浓度较高，应选择最适宜的抗体稀释度，优化稀释条件；抗体储存时间较长或储存条件不佳导致抗体失活：宜选择新的抗体。孵育中洗膜不充分：适当增加洗膜时间和次数；确保在充分震荡的条件下孵育膜，并且抗体充分覆盖膜表面。Western转膜液、封闭液等不新鲜或被污染，宜现配现用。

探针方法没有问题，一般建议在0.5-1ng/μl的浓度下进行Southern blotting检测。如果背景强而无斑点信号，可能是由于以下原因：1）DNA的质量不好；2）探针的质量不好；3）探针的浓度过高或过低；4）探针的长度过长或过短；5）探针的序列与目标DNA不匹配。