实验问答22,073,495 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问western blot 实验显影时PVDF膜上很多这种点点，很影响显影，请问怎么回事

土井挞克树

通常是由转膜时样品液体残留导致的。在样品液体转移到新的膜上的过程中，样品液体会从液体到气态的转化过程中逸出，而逸出的液体在转移过程中就会在新的膜上留下白斑。同时，如果在转膜过程中发生气泡，也有可能在膜上留下白斑。建议在转膜时仔细清洗PVDF膜和过滤器，使其表面干净。同时，可以尝试在转膜时加入足够的样品液体，避免膜表面产生空气的泡沫，减少白斑的产生。如果已经出现白斑，可以尝试重复转膜操作或者重新制备

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问his标签孵蛋白在目的带有阴影算表达了吗。

loveliufudan

his标签本身并不会导致蛋白质产生阴影或其他可观察的表达差异。如果您在目的中观察到阴影或其他表达差异，可能与其他因素有关，例如蛋白质的折叠状态、翻译后修饰、目的系统的代谢活性等。在这种情况下，进一步的实验和分析可能需要进行以确定具体原因。

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问1.为什么已经去除过DNA的WB样品还是有拖尾，裂解条件都一样，重复就出现拖尾？ 2.免疫荧光二抗孵育过夜才有效果是为什么？

dxyc42u

重复出现拖尾：可能是由于样品溶解效果不佳或分离胶浓度过大引起。建议：加样前离心；加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。

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问WB实验中一抗可以回收几次

huarenqiang5

一般情况下回收2－3次不影响效果。

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问请问细菌培养超时表达出来的蛋白纯度和质量还可信吗？大肠，摇了二十多小时

huarenqiang5

这个情况建议重新培养一次两者对比一下为好。

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问请问动物组织WB，每组跑3只的样本可以吗？

于小鱼鱼1998

可以的，一般每组最低3只，保持组间一致

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问CoIP实验中，怎么避免重轻链啊？

晓雨知春来

捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗

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问WB内参可比性疑惑，如何确保可比性

土井挞克树

看wb的条带形状，条带的粗细可以反映上样量差异，不一致的时候需要对细条带进行调整

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问实验小白一个，GST pull down应该如何下手？是否有专门的GST标签载体？载体如何构建？

loveliufudan

进行GST pull-down实验时，你可以按照以下步骤进行：1. 购买GST标签载体：GST标签通常与质粒载体一起购买。GST标签质粒是经过改造的质粒，其中包含GST基因序列，允许将GST蛋白与目标蛋白相互结合。2. 构建GST融合蛋白表达质粒：将你感兴趣的目标蛋白的编码序列与GST基因序列连接起来，构建GST融合蛋白表达质粒。这可以通过标准的分子生物学技术，如PCR扩增、限制酶切和连接，或使用

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问用贴壁细胞研究核蛋白的互作蛋白，请问提蛋白的裂解液有没有推荐，还有提蛋白的OD值最低多少？

loveliufudan

以下是一些建议： 1. 提蛋白的裂解液：选择适合你研究目的和细胞类型的提蛋白裂解液。常见的选择包括RIPA缓冲液、NP-40缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。根据具体实验要求，可以添加蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂、蛋白磷酸酯酶抑制剂等。 2. 提蛋白的OD值：在测定蛋白质浓度时，通常使用光密度（OD）来评估。然而，提蛋白的最低OD值没有固定的标准，因为它取决于所使用的测定方法和设备。一般来说，OD

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问免疫共沉淀实验中阴性对照抗体Igg是选择单克隆还是多克隆，或者是其他的？

RYX艳艳

使用对照抗体：（阴性和阳性）阴性：单克隆抗体：同一种属的IgG兔多克隆抗体：正常兔IgG阳性：细胞内某种蛋白的抗体（做膜蛋白A，用膜蛋白B）

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问响应面实验的学习教程有嘛？这个实验难不难呀？相比较正交实验而言建议选哪个做好？

loveliufudan

难度方面，响应面实验相对于正交实验设计可能更具挑战性。响应面实验设计需要更多的样本和试验，同时对于响应曲面的建模和分析也需要较高的统计分析能力。正交实验设计则是一种用于同时考虑多个因素的实验设计方法，通过有限的试验次数来确定因素的主效应和交互作用效应。正交实验设计的优势在于可以通过较少的试验次数获得有效的结果，同时分析和解释较为简单。哪种实验设计更合适取决于研究目标和可用资源。如果你关注特定因素和

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问CO-IP中用羊细胞做蛋白互作，阴性对照抗体如何选择？

RYX艳艳

阴性对照抗体需要选择同种属抗体，所以要选择羊属性蛋白做对照抗体

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问Wb总是跑的歪歪扭扭怎么破

于小鱼鱼1998

歪曲可能是由于电泳电流不均一，建议换电泳槽，或者不使用两边的孔。

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问论文写作中的WB图片怎么样才能做的好看？

huarenqiang5

可以使用office 2016进行编辑，步骤如下:1. 首先将WB的胶片结果扫描成图片格式。当然现在除了胶片法，比较流行的还有荧光二抗的方法直接扫描，这种直接导出图片就可以了。2. 新建一个PPT空白页，将WB图片贴入；3. 双击图片，调出图片处理页面，点击右上角的裁剪工具，将我们需要的条带裁剪出来；4. 点击左上角颜色-->重新着色-->灰度；5. 接下来给图片加一个黑色的边框：点击

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问考马斯亮蓝测蛋白浓度染色液量有要求吗？

huarenqiang5

用老马斯亮蓝测蛋白浓度时其染色液量在100毫升以上就可以了，用1比10的比例即可。

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问切膜曝光而被拒，原始数据证据不充分

土井挞克树

杂带过多可以纯化样品，去除杂质，或者做切膜处理

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问做wb的时候内参条带不齐

huarenqiang5

考虑奶粉封闭的问题，试试用乳清蛋白封闭。

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问科研小白求解答双荧光素酶实验

loveliufudan

1. 目的基因扩增：a. 设计引物：根据目的基因序列设计引物，其中一个引物应包含与pCDNA3.1载体的适配序列。确保引物的Tm值相近且特异性良好。b. 扩增PCR反应：使用源DNA作为模板，在PCR反应中使用目的基因引物对目的基因进行扩增。优化PCR反应条件以获得高产量和特异性的扩增产物。 2. 线性化pCDNA3.1载体：a. 提取载体DNA：使用合适的DNA提取方法从pCDNA3.1载体中

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问流式分析活性氧ROS

于小鱼鱼1998

用flowjo，或者express这些软件都可以分析流式结果

3 回答5114 围观

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