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问
请问细菌培养超时表达出来的蛋白纯度和质量还可信吗? 大肠,摇了二十多小时
huarenqiang5
这个情况建议重新培养一次两者对比一下为好。
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问
请问动物组织WB,每组跑3只的样本可以吗?
于小鱼鱼1998
可以的,一般每组最低3只,保持组间一致
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问
CoIP实验中,怎么避免重轻链啊?
晓雨知春来
捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种,使用针对检测抗体物种的特异性二抗
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问
WB内参可比性疑惑,如何确保可比性
土井挞克树
看wb的条带形状,条带的粗细可以反映上样量差异,不一致的时候需要对细条带进行调整
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问
实验小白一个,GST pull down应该如何下手?是否有专门的GST标签载体?载体如何构建?
loveliufudan
进行GST pull-down实验时,你可以按照以下步骤进行:1. 购买GST标签载体:GST标签通常与质粒载体一起购买。GST标签质粒是经过改造的质粒,其中包含GST基因序列,允许将GST蛋白与目标蛋白相互结合。2. 构建GST融合蛋白表达质粒:将你感兴趣的目标蛋白的编码序列与GST基因序列连接起来,构建GST融合蛋白表达质粒。这可以通过标准的分子生物学技术,如PCR扩增、限制酶切和连接,或使用
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问
用贴壁细胞研究核蛋白的互作蛋白,请问提蛋白的裂解液有没有推荐,还有提蛋白的OD值最低多少?
loveliufudan
以下是一些建议: 1. 提蛋白的裂解液:选择适合你研究目的和细胞类型的提蛋白裂解液。常见的选择包括RIPA缓冲液、NP-40缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。根据具体实验要求,可以添加蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂、蛋白磷酸酯酶抑制剂等。 2. 提蛋白的OD值:在测定蛋白质浓度时,通常使用光密度(OD)来评估。然而,提蛋白的最低OD值没有固定的标准,因为它取决于所使用的测定方法和设备。一般来说,OD
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问
免疫共沉淀实验中阴性对照抗体Igg是选择单克隆还是多克隆,或者是其他的?
RYX艳艳
使用对照抗体:(阴性和阳性)阴性:单克隆抗体:同一种属的IgG兔多克隆抗体:正常兔IgG阳性:细胞内某种蛋白的抗体(做膜蛋白A,用膜蛋白B)
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问
响应面实验的学习教程有嘛?这个实验难不难呀?相比较正交实验而言建议选哪个做好?
loveliufudan
难度方面,响应面实验相对于正交实验设计可能更具挑战性。响应面实验设计需要更多的样本和试验,同时对于响应曲面的建模和分析也需要较高的统计分析能力。正交实验设计则是一种用于同时考虑多个因素的实验设计方法,通过有限的试验次数来确定因素的主效应和交互作用效应。正交实验设计的优势在于可以通过较少的试验次数获得有效的结果,同时分析和解释较为简单。哪种实验设计更合适取决于研究目标和可用资源。如果你关注特定因素和
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问
CO-IP中用羊细胞做蛋白互作,阴性对照抗体如何选择?
RYX艳艳
阴性对照抗体需要选择同种属抗体,所以要选择羊属性蛋白做对照抗体
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问
Wb总是跑的歪歪扭扭怎么破
于小鱼鱼1998
歪曲可能是由于电泳电流不均一,建议 换电泳槽,或者不使用两边的孔。
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问
论文写作中的WB图片怎么样才能做的好看?
huarenqiang5
可以使用office 2016进行编辑,步骤如下:1. 首先将WB的胶片结果扫描成图片格式。当然现在除了胶片法,比较流行的还有荧光二抗的方法直接扫描,这种直接导出图片就可以了。2. 新建一个PPT空白页,将WB图片贴入;3. 双击图片,调出图片处理页面,点击右上角的裁剪工具,将我们需要的条带裁剪出来;4. 点击左上角颜色-->重新着色-->灰度;5. 接下来给图片加一个黑色的边框:点击
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问
考马斯亮蓝测蛋白浓度染色液量有要求吗?
huarenqiang5
用老马斯亮蓝测蛋白浓度时其染色液量在100毫升以上就可以了,用1比10的比例即可。
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问
切膜曝光而被拒,原始数据证据不充分
土井挞克树
杂带过多可以纯化样品,去除杂质,或者做切膜处理
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问
做wb的时候内参条带不齐
huarenqiang5
考虑奶粉封闭的问题,试试用乳清蛋白封闭。
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问
科研小白求解答双荧光素酶实验
loveliufudan
1. 目的基因扩增:a. 设计引物:根据目的基因序列设计引物,其中一个引物应包含与pCDNA3.1载体的适配序列。确保引物的Tm值相近且特异性良好。b. 扩增PCR反应:使用源DNA作为模板,在PCR反应中使用目的基因引物对目的基因进行扩增。优化PCR反应条件以获得高产量和特异性的扩增产物。 2. 线性化pCDNA3.1载体:a. 提取载体DNA:使用合适的DNA提取方法从pCDNA3.1载体中
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问
流式分析活性氧ROS
于小鱼鱼1998
用flowjo,或者express这些软件都可以分析流式结果
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问
用碧❌❌ 的 western细胞裂解液时候没有等它完全溶解,就分装了2瓶15ml其中一瓶已经在用另一瓶也还冻着,我现在该如何处理
晓雨知春来
可以将两瓶液体倒入一个干净的容器中,并轻轻搅拌以混合液体然后,根据需要重新分装到适当的容器中。
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问
geo数据库里最高差异表达基因的genesymbol重复项直接删除吗
huarenqiang5
最高差异表达基因的genesymbol的重复项可以直接删除。
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问
蛋白半衰期?
huarenqiang5
他的半衰期长短不一,其所在部位不一而时间不一,几小时到48小时不等。
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问
亲们,谁能帮帮我,这是怎么了
申东熙老伯
配胶或者转膜问题,可能配的胶不均匀或者转膜的时候膜与胶之间滑动了。
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