做wb的时候内参条带不齐

考虑奶粉封闭的问题，试试用乳清蛋白封闭。

WB内参条带不齐可能是以下原因导致的：

蛋白本身问题

胶配的不均匀

抗体孵育问题

显影剂混合不均

解决方法：

确认每个样品表达GAPDH的量一样

调整上样量一样再检测GAPDH

混合比例，调整蛋白浓度

更换内参试试。

内参不齐可能是上样量不均匀，建议统一上样量

可能有以下几个原因：

1. 样品负载不均匀：确保在准备样品时，使用相同的蛋白质负载量。使用总蛋白负载控制方法（例如BCA或Bradford方法）可以帮助确保每个样品中相同数量的蛋白质被加载。

2. 蛋白质迁移问题：确认电泳条件是否正确。如果内参蛋白质迁移得太快或太慢，可以调整电泳条件，例如电流强度、电泳时间或使用不同的凝胶百分比。

3. 抗体结合问题：检查内参抗体的质量和稀释倍数是否正确。确保抗体与目标蛋白质充分结合，可以通过优化抗体浓度和孵育时间来改善结果。

4. 检测方法问题：确认所使用的检测方法是否正确。例如，如果使用化学发光检测，确保显影时间适当，并检查曝光条件是否准确。

5. 蛋白质降解或不稳定性：一些蛋白质在样品制备或处理过程中可能会发生降解。确保样品制备和处理过程中的蛋白质稳定性，可以使用蛋白酶抑制剂和保护剂来防止蛋白质降解。