WB内参可比性疑惑，如何确保可比性

看wb的条带形状，条带的粗细可以反映上样量差异，不一致的时候需要对细条带进行调整

如果条带的深浅和粗细是差不多的，说明上样量基本相同，可以按照此上样量进行实验，反之，如果粗细深浅差异大，则说明上样量差异较大，需要调整

选择β-actin作为内参，通过观察其在Western blot中的条带粗细和深浅一致性，可以初步判断上样的细胞量大致相同。如果条带粗细深浅存在差异，可能意味着上样的细胞量不均匀或者存在其他影响条带强度的因素。

如果你希望调整上样细胞量以保证内参的一致性，可以尝试以下方法：

1. 根据预期的目的蛋白表达量差异，调整上样细胞的数量，使其接近相等。可以在初步试验中进行多组不同细胞量的上样，然后选择表达量接近的条件进行进一步实验。

2. 使用其他内参蛋白来进行验证。除了β-actin，还有其他常用的内参蛋白，如GAPDH或α-tubulin。通过同时检测多个内参蛋白，可以更准确地评估细胞量的一致性。

关于BCA法确定的是每个样品上样总蛋白浓度相同的问题，你是正确的。BCA法通常用于确定样品中总蛋白的浓度，而不是目的蛋白的浓度。在Western blot中，利用相等的总蛋白量来加载每个样品，可以在某种程度上确保目的蛋白之间的相对表达量比较。然而，如果存在目的蛋白表达差异，这种方法并不能保证内参的绝对相同性。

因此，为了更准确地比较不同样品中目的蛋白的表达量，建议使用标准化的方法，如相对定量或绝对定量。这些方法可以通过正规化目的蛋白的表达量，考虑到内参的变异性，并得出更可靠的结果。这些方法可能需要使用额外的技术，如免疫印迹的线性范围内的定量标准品或定量PCR。