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问
内参总是一条线是啥原因
周末也要努力呀
可以用少孔梳子。其次减少蛋白上样量,此外,还与胶有关系,预制胶好一些。
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问
Wb内参选择,立春红结果可信吗
huarenqiang5
wb内参选择,立春红的结果是可信的,没有问题。
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问
有没有一个可能,某个转录因子对下游分子表达的影响在不同组织不一样呢?在这个组织细胞是上调,另一个是下调?
ywb597747367
https://www.nature.com/articles/ncb3613可参考本文献。在给出的文献中,DKK1(非转录因子)对乳腺癌肺转移为抑制作用,而对骨转移为抑制作用
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问
用乙醇回流提取得到的液体,过滤后,浓缩到什么样的程度就可以不用浓缩了,然后冷冻冻干?
土井挞克树
一般浓缩到90%左右就可以进行冷冻冻干了
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问
WB 肌肉组织actin跑不出来
土井挞克树
那考虑是内参actin与肌肉组织的适配度太差,建议更换适配度高的内参
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问
在WB中,小鼠的后腿肌肉的Actin为什么跑不出条带?
粥辰辰辰辰
多数情况是抗体加错了;如果中间出现了微弱的条带,可能原因是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,ECL发光液稀释过高或失效。若转膜出现了失误,比如膜放反了,肯定白片
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问
中药石见穿中的迷迭香酸用多少浓度的乙醇回流提取好?可以用乙醇回流提取得到嘛?
于小鱼鱼1998
一般选用90%-95%的浓度乙醇就可以
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问
对中药粉末用乙醇提取回流的时候,什么时候开始计时是准的?
土井挞克树
一般是以沸腾作为起始时间进行计时
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问
GST标签的pulldown实验洗不干净怎么办
土井挞克树
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问
为什么我跑的凝胶,银染后会有一条连着的条带,没加样的泳道也有
此用户已注销
质量问题:试剂的质量问题同样会影响实验效果。如果使用的试剂质量不佳,银染条带就可能出现不均匀或出现明暗不一、模糊或假阳性的情况。
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问
蛋白质糖基化位点与标准品不匹配该怎么办?
于小鱼鱼1998
可以做标准品调整,或者选用匹配的标准品
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问
请问打质谱后进行蛋白组学数据分析需要重复几次才有说服力,感觉平行性不太好?
于小鱼鱼1998
3-5次,理论上最少3次才具有说服力
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问
请问不同样品必须需要去除高丰度蛋白吗?如果需要去除,用试剂盒效率怎样?
于小鱼鱼1998
需要的,可以用试剂盒效率进行去除,不去除后续会影响实验进行
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问
跑电泳条带时两侧上翘,和中间不在一个水平线上是什么原因?
sswei
形成原因:主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的,多出现于较厚的凝胶中。处理办法:待其充分凝固再做实验
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问
怎么绝对定量分析蛋白含量
土井挞克树
蛋白质绝对定量分析依赖于已知浓度的内标肽(命名为AQUA),内标肽通常由含同位素的氨基酸的组成,以便与天然肽区分开来,利用串联质谱法检测引入了已知浓度内标肽的细胞裂解液,通过内标肽与天然肽的质谱测定比率,可以将天然肽的相对定量数值转化为绝对含量数值,在多肽、蛋白质水平测定以及蛋白翻译后修饰研究中广泛应用。
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问
SEC凝胶色谱柱 被蛋白污染 进空白有峰 如何冲洗
土井挞克树
用流动的蒸馏水进行冲洗,冲洗3-5次
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问
请问这个蛋白组测序送样本有什么要求嘛?
sswei
1、 样品纯度应达到95%以上(HPLC), 标明准确纯度, N-端必须是均一的高纯样品,并纯度越高,实验结果越理想.纯度可以用采用HPLC,SDS-PAGE或质谱或CE鉴定,建议用2种方法鉴定。2、 样品量不低于50Pmol ,若浓度为5pmol/μl, 体积不少于10μl, 大于10pmol/μl 越好,并标明准确浓度。例如:分子量20000的蛋白,50Pmol约为1微克.3、 标明样品缓冲液
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问
为什么我的二维电泳跑出来感觉分辨不到目标蛋白。
于小鱼鱼1998
考虑是目标蛋白可能分子量太大了,这个时候要调整电泳相关参数
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问
做蛋白组学,组织可以放负80度多久?
huarenqiang5
在-80°可以放半年左右没问题,如果时间久了会对样品的稳定性有一定的影响。
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问
两个不同种属来源的单克隆一抗指标,能否在一张膜上同时孵育?
huarenqiang5
两个不同种属来源的单克隆一抗指标不能在一张膜上同时进行孵育。
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