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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞实验WB重复几次？和复孔的关系

dxy_xextz7w2

一般是重复三次，可以是同一个样三次也可以是不同的样三次

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问谁知道U盘的文件删了又出现了老是删了又出现是怎么回事呀

胡小赖hu

电脑问题，笔记本一般不会，有的台式机会出现

11 回答7029 围观

问做蛋白转印时，SDSPAGE胶需要电泳到溴酚蓝跑出来吗？还是可以电泳到蛋白marker条带分开到一定程度就可以停止电泳？

dxy_ls40bam

不需要，根据你的蛋白是否跑开决定跑的时间

5 回答1146 围观

问为什么在SDSPAGE电泳时，在浓缩胶层，溴酚蓝总是向四处扩散？

balalaLy

可以在溴酚蓝buffer中添加巯基乙醇

3 回答980 围观

问为什么转印结束后立春红染色没有蛋白条带，只有蛋白marker?

dxy_ls40bam

很可能你的蛋白没有转到膜上去。

3 回答1099 围观

问请问在大队列蛋白质组学实验中，上样顺序是否影响样本搜库结果？在前处理，数据搜库，分析过程中如何控制批次差异？

huarenqiang5

前处理建议使用全自动蛋白组学样本前处理平台进行。此平台可兼容多种蛋白酶解方法，如溶液内酶解，基于过滤板的FASP（Filter aided sample preparation）方式，柱上酶切，基于磁珠的样本前处理等。 Resolvex A200正压模块可实现基于Filter Plate的FASP酶切流程可实现基于SPE（Solid phase extraction）96孔板的高通量肽段脱

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问HPLC检测样品中含量少的成分使用什么方法？

huarenqiang5

在采用HPLC法进行含量测定时，可以采用内加法或外加法进行定量。内加法是指在样品中添加一定量的定量物质（称为内标物），然后通过测定样品和内标物的相对含量来确定样品中待测物质的含量。外加法是指在样品外添加一定量的定量物质（称为外标物），然后通过测定样品和外标物的相对含量来确定样品中待测物质的含量。

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问小鼠血浆炎症因子组内平行性不好

huarenqiang5

建议取样时尽量先取到一个容器，混匀再均分到平行样，这样避免上下层SS不同带来的误差。分光光度要求消解后的样品要均匀透明不含杂质，你可以将消解样稀释后，取上清液比色测定。

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问小鼠被根神经节（DRG）取材后提取蛋白做WB，大概个数和质量，以及RIPA裂解比例多少比较合适呢？

huarenqiang5

做wb一般需要1个小鼠被根神经节。加入RIPA裂解液12孔板100ul/孔，6孔板200ul/孔。

4 回答2248 围观

问现在大多数期刊要求整膜，但跑整膜效率太低，有什么方法可以提高效率吗？

土井挞克树

浸泡PVDF膜5-10分钟，或者增加转膜时间，一定要注意散热，这很关键，冰融化了要及时更换。

3 回答392 围观

问跑第一向时，为什么刚开始的电压比较低，而后逐渐增高？为什么电压总达不到预定值？为什么在两个电极丝附近有气泡产生？

huarenqiang5

电极丝有气泡考虑以下几点原因:1、电极材料质量问题：电极材料的质量不好、杂质较多或者未经过充分处理等情况，会导致电极表面不光洁或存在微小裂纹，从而影响电极的性能。2、电极制作工艺不当：电极的制作过程中，若操作不当、温度控制不准确等，也会导致电极表面出现气泡、开裂等问题。3、电极使用环境问题：电极在使用过程中若受到一些外力作用，例如振动、冲击等，也会导致电极表面的开裂和损坏。

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问经 WB 检测，未检测到的蛋白，质谱可以检测到吗？

晓雨知春来

WB未检测到的蛋白有些是由于蛋白本身表达量低，抗体难以识别到，也有些是于抗体本身效价低等原因。对于质谱而言，其识别目标蛋白的原理与抗体不同，其可以检测到低丰度的蛋白，但是低丰度的蛋白信号容易被高丰度蛋白掩盖掉，可能需要通过富集或者分流分等前处理方法提高目标蛋白的相对丰度，再进行质谱检测。另外，WB未检测到的蛋白不一定是因为丰度低的原因，也可能是因为抗体效价低、样本中蛋白提取不充分或存在杂带掩盖等原

4 回答631 围观

问Wb转膜电压最佳是多少？

晓雨知春来

恒压最佳电压是90V-110V，控制电流不要超过300ma。

4 回答7448 围观

问做质谱时如何避免样品污染？

晓雨知春来

1. 液质系统使用洁净度和无颗粒物杂质的LC-MS级试剂。试剂应当是在生产是采用0.2 μm进行预过滤的，但是不要在使用前再次过滤，这样会引入新的污染。2. 使用超纯水纯水系统的输出管路如果超过24小时没有水流动，需要打开冲洗20min，以排除微生物增殖。3. 注意添加试剂的使用量• 为了降低背景，使用最少量的、高质量流动相添加试剂（例如，添加0.1

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问质谱鉴定打出的蛋白非常多是什么原因？

高山云初

蛋白有很大可能性是做实验时不小心混入的污染蛋白，一般搜库之后都会将这些污染蛋白去除的。

4 回答526 围观

问处理FFPE样本的时候，不同成分的裂解液对结果的影响大不大？

周末也要努力呀

不同批次只要裂解完全，结果差异就不大

3 回答209 围观

问条带结果为啥拉的这么长

周末也要努力呀

跟胶有很大关系，建议制备胶过程中混匀涡旋。其次，可以试一下预制胶，假如不一样，那就可能是胶问题了。

3 回答245 围观

问内参总是一条线是啥原因

周末也要努力呀

可以用少孔梳子。其次减少蛋白上样量，此外，还与胶有关系，预制胶好一些。

3 回答293 围观

问Wb内参选择，立春红结果可信吗

huarenqiang5

wb内参选择，立春红的结果是可信的，没有问题。

4 回答409 围观

问有没有一个可能，某个转录因子对下游分子表达的影响在不同组织不一样呢？在这个组织细胞是上调，另一个是下调？

ywb597747367

https://www.nature.com/articles/ncb3613可参考本文献。在给出的文献中，DKK1（非转录因子）对乳腺癌肺转移为抑制作用，而对骨转移为抑制作用

5 回答369 围观

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