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问
病理科的标本(肿瘤) 石蜡切片,可以做western blot吗?
zq2008fish
可以的,用过西安晶彩的石蜡组织蛋白提取试剂盒提蛋白,再按常规WB实验操作,做出来效果还不错。
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问
Nrf2 这个蛋白怎么做出来?
qinsiman
Nrf2蛋白存在量很少,所以要看你是否用了正确的抗体和跑胶浓度,一般用sant cruz的抗体,且上样量为30-40 ul左右
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问
转膜是电流异常升高是为什么?
无情伤流水
一般是配方问题 电流过大 转膜会出问题
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问
为什么曝光出来目的条带总是黑黑的一团,而不是一个小条带?
benjimmy33108
建议上述liona_lin的建议:降低上样量,降低一抗浓度以及调整曝光时间
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问
封闭之后需要用 TBST 洗吗?
wd26persist
如果封闭液是5%的牛奶,而一抗稀释液1%de BSA的话,需要用TBST过一下
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问
蛋白纯化时为什么检测不到杂蛋白?
kedaxiaoyu
穿透里检测也没有蛋白条带吗?敢问你是用什么洗脱液洗脱的,一般都是用咪唑,0.5M的咪唑柱子上的所有的蛋白基本上都就洗下来了(如果咪唑实在洗不下来的话可以用EDTA洗)……至于你所说的纯化得到目的蛋白,这个咪唑的洗脱浓度还得靠你自己去摸索。你说的是蛋白洗不下来,建议你如果是用低于0.5M的咪唑洗的话,可以考虑0-0.5M的咪唑走个短点的线性梯度,可以大概看下目的蛋白洗脱的大致咪唑浓度。
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问
蛋白质免疫印迹一1抗2抗用什么稀释更好?
蜻蜓美女
1,我们实验室是用牛奶加TTBS稀释的,但是磷酸化的抗体一般是BSA加TTBS,效果很好。2,我们实验室是用水。希望对你有帮助
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问
为什么 DAB 显色实验的条带弄干后总是白色?
200210lee
浓度过高,过曝了。建议降低样品,一抗,二抗浓度。
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问
实验设计中的问题 :提取膜蛋白(受体蛋白)后做western好出结果么?
尼克酰胺腺嘌呤二
无论是提取过程还是WB过程都需要做仔细一些,可以用一些好的产品。
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问
WB转膜曝光后少样本是为什么?
phhcrab
你是用传统胶片曝光的还是化学发光成像?每次都出不来的是同一个泳道的吗?如果每次都是固定的位置出不来,是不是可以检查一下实验硬件?
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问
兔子试验为什么血液离心后呈淡红色?
wxdfrank
可能是溶血了。用空针采血后,不要直接把针头插入真空抗凝管中放血,这样容易导致红细胞破裂。应该吧针头取下,揭开真空抗凝采血管的盖子后,慢慢将注射器中的血液打入抗凝管中,可以避免。或者改用真空采血管专用的采血针。
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问
wentern blot抗体孵育,PVDF膜上是否可以同时孵育不同种属来源的两种蛋白?
应用场景
即使是相同分子量蛋白,用li-cor odyssey的两个近红外荧光通道也可以同时孵育不同种属一抗,二抗,同时扫描曝光,类实验常见于磷酸化蛋白检测。
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问
求高手指点 WB 曝光为什么出现反影?
lostree5544
最简单的方法就是换下试剂,之前我们也是遇到了麻烦,百思不得其解,老板给的意见,结果就这么出结果了.请问你片子是机器洗出来的,还是手工的呢?
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问
怎么通过一张片子上的条带就知道它的分子量?
joson12345
发光marker啊,曝光时和目的蛋白同时显影,而且分子量相对预染的要更加准确。
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问
WB 条带上出现类似气泡的东西该如何改善?
tao0129
配胶用玻璃板和边条应及时洗净。玻板未洗净的坏处很多:1. 尽管玻璃看似平滑,但是一些细微的凹陷处会凝结肉眼无法分辨的胶颗粒(摸上去疙疙瘩瘩),其坏处是,在该部位极易导致不均匀的胶块,样品经过该处或电泳散热不好,条带变形。2. 如果是RNA的超薄胶,胶板的颗粒会导致局部巨大气泡,非常难于清除;蛋白胶也会导致一些小气泡的产生。3. 玻板没洗净的另一个坏处是,由中学物理知识可知,玻璃表面越光滑粘附越牢,
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问
加样的时候样品老飘出来是为什么?
天野
1.loading buffer的甘油太少,时间放置过长,浓度不对(5×、1×)2.电泳液放置时间过长、浓度太高3、胶没配好或拔梳子用力不均匀,上样孔中有凝胶
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问
为什么 WB 未显影?
木木的世界
转膜的时候,一张膜的电极放反了,就会导致蛋白没有转到膜上。
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问
血浆可以做 Elisa 实验吗?
闫棟涵777
紫盖采血器采血后离心结果影响大么
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问
western相关试剂怎么选?
我是金博士
BSA 亚科的我们用3%封闭液我们一般用3-5次,4度保存是的用undefined的洗涤缓冲液,这几个蛋白我们做的多了,easy
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问
WB,条带特别多,不知道是哪条?
moxucheng
二抗有问题
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