登录
搜索
提问
我要登录
|免费注册
首页
>
实验问答
>
蛋白质
实验问答
21,938,888 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
凝胶过滤层析相关的问题
vae1476
样本本身杂质太多或者层析柱污染,都有可能造成这种情况
6 回答
835 围观
6 回答
835 围观
去回答
问
wb和免疫组化可以用同一种抗体吗,抗体怎样保存最好。
迟C迟
可以到卖抗体的公司网站上查一下适用实验。抗体可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。
6 回答
860 围观
6 回答
860 围观
去回答
问
我想问一下一抗以及二抗和抗原结合的原理,以及有没有什么办法提前检验抗体质量。
whilt-shirt
一抗是针对抗原的抗体,二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说,抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答,由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团,而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗)
3 回答
3084 围观
3 回答
3084 围观
去回答
问
WB时为什么跑出来的条带总是斜的
迟C迟
主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀,造成条带未能直线跑完,电泳凝胶中混入气泡,造成条带被挤压倾斜,也可能是样品和缓冲液有干扰,造成条带迁移率不统一,另外上样量过大,被其他泳道挤压也有可能。
4 回答
3427 围观
4 回答
3427 围观
去回答
问
蛋白裂解到底多长时间就可以呢?
迟C迟
加RIPA裂解液,4℃摇床上裂解26h和14h即可。
5 回答
2207 围观
5 回答
2207 围观
去回答
问
怎样确定最佳缓冲条件和浓度使非特异性结合到羧酸酯化葡聚糖上的靶蛋白和配体蛋白最小化。
dxy_gwrp7ndq
可以进行预实验确定最佳缓冲条件和浓度使非特异性结合到羧酸酯化葡聚糖上的靶蛋白和配体蛋白最小化。
2 回答
479 围观
2 回答
479 围观
去回答
问
18%分离胶跑酶解蛋白,60mg/ml 上样量10ul,80V浓缩胶120v分离胶跑出条带呈Y型且拖尾严重,求解
dxy_gwrp7ndq
如果蛋白含二硫键的话,还原剂量不足,可能会导致蛋白在跑胶过程中的动态成键,也可能形成拖尾。"拖尾"现象是电泳中最常见的现象。这常常是由于样品溶解不佳引起的,克服的办法是在加样前离心,选用合适的样品缓冲液和凝胶缓冲液,加增溶辅助试剂。另一方法是降低凝胶浓度。
5 回答
864 围观
5 回答
864 围观
去回答
问
请问PI3K-AKT信号通路里的PDK1用WB检测的时候一般测总量,还是测其磷酸化啊?!
府宅
PI3K-AKT通路一般测AKT/PKB信号通路磷酸化蛋白,可以通过检测抗体芯片(PAB216)
5 回答
628 围观
5 回答
628 围观
去回答
问
敷内参tubulin出现70kd左右的条带是为什么?
dxy_gwrp7ndq
可以用已报道的该蛋白有表达的细胞系做一个对照,最好是抗体说明书上用到的细胞系,这样就可以看看到底是你样品的问题,还是WB体系的问题。
6 回答
1112 围观
6 回答
1112 围观
去回答
问
我在跑蛋白的时候,经常遇到泳道一个隔一个有印记,中间的泳道空空如也的情况,检查了转膜液 电泳液 都没有问题,是怎么回事?
bamboopiggy
主要有泳道的影,就不是液体的问题,大概率是你的蛋白坏掉了,建议用新鲜样品。
4 回答
406 围观
4 回答
406 围观
去回答
问
使用快速封闭的试剂,封闭时间过长会导致一抗孵不上去吗?
bamboopiggy
不会减少封闭时间,只是为了缩短你最实验的时间,封闭时间长了没问题。
7 回答
3712 围观
7 回答
3712 围观
去回答
问
跑出来的胶如果能记得加样顺序,那还分正反吗?对转膜应该没有影响吧?
bqejjh123
封闭时使用封闭液,液体盖过膜就好,所以无所谓正反,基本没什么影响
5 回答
410 围观
5 回答
410 围观
去回答
问
制胶的时候上层浓缩胶制少了,下层多了,但是梳子插得进去,在跑的时候怎么设置参数?
bamboopiggy
可以适当降低电压,由原来的80吧,改为40-60v,跑的慢一些。让蛋白在浓缩胶和分离胶之间能压成一条线就可以。
2 回答
1400 围观
2 回答
1400 围观
去回答
问
保存的蛋白质复性,一般使用多少度水浴?到什么程度是复性成功呢?
未来9
样品放入零下20度冰箱中储存,需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样,以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
3 回答
739 围观
3 回答
739 围观
去回答
问
同样一起跑的条带两边跑的速度不一样是因为什么?
bamboopiggy
大概率是你胶灌的不匀,但是也可能是跑胶槽子里的金属丝坏了,导致电流不匀。
3 回答
561 围观
3 回答
561 围观
去回答
问
转膜液可以回收吗?能重复利用几次?剩下的能放置多久?
迟C迟
转膜液不需要现配现用,4°保存可以反复使用至少7次, 对WB的结果不起决定性作用. 现配现用,用完倒掉会造成严重的环境污染
6 回答
2453 围观
6 回答
2453 围观
去回答
问
蛋白标本保存时加入稳定剂如甘油、白蛋白,会影响之后跑蛋白的结果吗?哪种稳定剂最好?
迟C迟
稳定剂不影响跑蛋白结果,一般保存的时候会加入甘油。
6 回答
1181 围观
6 回答
1181 围观
去回答
问
用比色皿还是微孔法好呢?总体算下来,哪个更节约经费啊?
bamboopiggy
微孔法啊,上样量少,省时间。还不用洗皿。
3 回答
480 围观
3 回答
480 围观
去回答
问
使用超声破碎还是钢珠会更适合?
dxy_gwrp7ndq
超声波破碎很强烈,适用于多数微生物的破碎,但有效能利用率低,破碎过程产生大量的热,且对冷却的要求相当苛刻,故不易放大,主要用于实验室规模的细胞破碎。
5 回答
1032 围观
5 回答
1032 围观
去回答
问
配置的蛋白标准液是现配好,还是提前配好−80度冻上?
迟C迟
那得看用什么检测了双缩脲法需要现配置水合茚三酮可以使用提前配置好的溶液
5 回答
475 围观
5 回答
475 围观
去回答
1
•••
140
141
142
143
144
•••
172
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序