实验问答22,778,631 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问LC3B的WB实验中，出现LC3B1 LC3B2两个条带，一般是使用LC3B2/1还是LC3B2与housekeeping蛋白比

天一湖医者

如果连内参都出现两条带，且彼此很接近，就要考虑是否是蛋白样本降解了；这是一般考虑使用LC3B2/1。

2 回答2906 围观

问噬盐菌光合磷酸化为什么不能代替复杂低效的光合磷酸化?

洛噜啦噜啦嘞

嗜盐菌紫膜的光合作用是迄今为止所发现的最简单的光合磷酸化反应嗜盐菌的菌视紫素和光介导 (Light-mediated)ATP 合成系统：在厌氧光照条件下培养嗜盐菌时,产生一种菌视紫素嵌入细胞质膜中,成为紫膜,使菌体呈现红紫色.紫膜的膜片约占全膜的50%,由 25%的脂类和75%的蛋白质组成.这种蛋白质与动物视觉器官的感光细胞中的视紫红质（rhodopsin）相似,也含有视紫素,被称为菌视紫素.嗜盐

2 回答920 围观

问WB条带形状是圆形不是条形怎么办

bamboopiggy

如果有趋势，可以直接用，没事，估计是你胶灌的不匀

5 回答1707 围观

问WB跑不出来内参蛋白怎么办

dxy_gwrp7ndq

检查封闭剂浓度是否使用正确，一般3%脱脂奶即可；重新稀释一抗，并降低二抗使用浓度；也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性，如果发光western marker信号同样背景很重，基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题，试剂要逐一排查。

4 回答2051 围观

问电转液需要加多少甲醇？

lijUn5895

标准的湿转缓冲液和电泳缓冲液一样，为不含SDS 的1X Tris-gly 缓冲液，加入甲醇至终浓度20%。如果转膜的蛋白分子量大于80kDa，则推荐加入SDS 使之终浓度为0.1%。

6 回答1235 围观

问蛋白质溶液-20℃保存一段时间溶解后出现混浊

dxy_gwrp7ndq

长期保存可放-20C，但前提是添加50％甘油或冻干，否则冻融也会导致蛋白失活！

3 回答1024 围观

问做细胞的过表达时，片段设计的最佳长度是多少？

bamboopiggy

这个取决于你的实验目的，看你要过表达的蛋白有多长啊，如果你问的是primer的长度，那至少要保证有15个以上的片段加酶切位点，加保护碱基，大概有25-30bp吧

3 回答409 围观

问酵母双杂的菌为什么在四缺板子上生长会变红，在四缺上划线有菌落生成但是是偏红那算互作吗

小京20

楼主，答案找到了吗？我也遇到了同样的问题，期待答疑。

4 回答3323 围观

问跑蛋白配的一抗和二抗最多用几次？

bamboopiggy

看你用什么配的抗体，如果是牛奶，用2-3次吧，买个一抗稀释液可能会好一些。至于tlr4，你先看你抗体说明书上在什么位置吧，一般预测条带和实际条带会有差距

5 回答1341 围观

问请问大家，P62跑出来总是2条带是因为降解了吗，其中有个样本内参有但所有目的蛋白都没有

bamboopiggy

5号蛋白大概率降解了。p62你两条带的趋势一致，问题不大，可以用

3 回答1397 围观

问为什么重组载体会出现多了一段His标签的情况

Topmicro

应该是你设计引物的时候认为添加的his-tag，建议你查一下原始试验记录看看。

3 回答387 围观

问原核表达蛋白，出现条带大小不对怎么办？

未来9

通常就是以下两个原因的:一是蛋白本身有问题，另一个就是在实验过程中降解了

3 回答1660 围观

问各位老师跑cleaved caspase3是怎么跑的呀，为啥我跑了3次都是白板？

dxy_gwrp7ndq

可能是你分离胶的浓度不对，有预染marker的话，可以加一道预染marker。

3 回答815 围观

问Co-IP时，Input的带型不够亮，怎么解决？

天一湖医者

Co-IP时，Input的带型不够亮，可以瞬转通过表达解决。

3 回答485 围观

问请问Co-Ip如何选择合适的Input对照和同型对照？有什么要求和原则吗？

府宅

Co-IP使用Input阳性对照即可，Input即实验使用的细胞裂解液

3 回答545 围观

问检测到的条带分子质量与预测的不符?有哪几种可能的原因

小米粒e

可能基因有污染可能是非特异性扩增，引物特异性不高，退火温度不理想都会这样。

6 回答407 围观

问WB条带有点宽呢，呜呜呜

zj佐罗

是蛋白没有分开？蛋白没有分开，可以考虑延长电泳时间，或是使用更大的胶，或是做浓度梯度的胶还是蛋白拖带？蛋白拖带，考虑先纯化蛋白，用高浓度胶进行电泳，电泳槽在电泳过程中放在冰水，保持低温，转膜过程也放在冰水中进行，防止降解。希望对你有帮助。

8 回答1826 围观

问关于免疫印迹实验的相关问题

小米粒e

注意一下跑胶时候的电压以及时间，跑的时候经常看着点。转膜的时候记得缓冲液新配置

7 回答474 围观

问我做coip实验用的是碧云天的兔IgG，效果不好。请问大家用的都是什么牌子的IgG啊？

小米粒e

我用的也是santa cruz。

6 回答866 围观

问想问一下用Krytox和PFH材料制备纳米液滴，在透析除盐的时候为什么会出现沉淀呀？感觉是这些纳米液滴聚集在一起了。

lijUn5895

蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。3.透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。4.透析袋不干净

3 回答644 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序