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问
大家用超敏化学发光成像仪显影western blot时是怎么加显影液的?
whilt-shirt
显影液现用现配,均匀加在条带上,然后晃匀
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问
蛋白条带有点弥散,这种情况怎么解决
bamboopiggy
没事,这样就可以用,条带还是很好的
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问
问一下,机器显影同一张wb膜,加显影液使得显影液铺满膜后需一不需要把膜上多余液体吸干
bamboopiggy
对,要把多余液体吸掉,但是不能吸干,膜要是湿的
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问
蛋白诱导时试了37 28 16℃ 都表达在沉淀形成包涵体了 16℃都没有还有再试温度(比如25 32℃)的必要吗?
未来9
诱导温度一般控制在15-25℃时能够减少蛋白包涵体形成,因此25℃以上应该可以形成包涵体。可以再改善温度以外的因素:比如诱导剂浓度等。
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问
求助,同时跑的胶,为什么会这样,分子量分别为36(内参)、28(AQP2)、65(NK-KB)
Summeryi
第一张背景过强,可以通过增加封闭时间或者洗膜的次数来改善。后面两张的蛋白有不同程度的降解,实验的样品尽量避免反复冻融,并且低温保存~
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问
CO—IP实验组背景脏,看不清条带,有什么优化办法么?
bamboopiggy
你的total input呢?是不是wb的抗体不好使,检测不到
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问
co—ip可以用beads+裂解液来做IgG么?
bamboopiggy
不能,igG是阴性对照,要排除抗体的重链轻链的影响。以及非特异性结合
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问
为什么bcl2和bax在wb和qpcr中结果都是同时增加的呀?
bamboopiggy
Bcl-2与Bax共属于一个家族,通过控制线粒体膜的通透性来调节凋亡激活物如细胞色素c的释放来影响细胞的状态。bax二聚体在膜上打开通道,增加通透性;bcl-2与bax形成异聚体,降低通透性。所以,bcl-2水平的升高和bax的降低表明细胞对凋亡的抵抗性增强,应该是保护药物起作用的标志;而反之则相反。现在你作出来的变化既然一致,那你可以试试计算bcl-2/bax的比值,比值越大,说明抗凋亡能力越强
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问
请问 wb实验 条带空白怎么办 是什么原因呢 求大神
未来9
wb无条带的原因很多,要逐一排除哦,比如:抗体用错,转膜出错,抗原无表达,试剂失效等,都会导致空白条带。
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问
用RIPA提取总蛋白为什么会有粘稠的不可溶沉淀?是什么?如何解决?
dxy_gwrp7ndq
产生粘稠物的主要原因是RIPA不能将所有样品全部裂解,产生的不可溶组分中主要含有核酸残团,细胞碎片(有些组织样品还含有油脂),和部分蛋白,因此RIPA提取的仅仅是可溶性蛋白,并非真正的总蛋白。
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问
慢病毒转染细胞的构建筛选
bamboopiggy
嘌呤霉素筛的还是比较快的,一般1-2周就可以了。主要看细胞状态。
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问
coip蛋白降解,怎么办?
bamboopiggy
1.注意冰上操作 2.加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂
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问
目的蛋白没有条带是什么原因?
Topmicro
目的蛋白没有条带的原因有很多,比如目的蛋白没有表达或者表达之后又降解了。
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问
有人跑过hes5,light的wb吗?跑了结果不理想,有什么条件跑wb供参考吗。提这2种蛋白有特殊的吗?
bamboopiggy
你所谓的结果不理想是条带不清楚还是没有?条带不清楚,可以尝试增加抗体浓度或上样量,没有条带可以尝试跑全膜
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问
小鼠肠蛋白,dapdh,想问下背景深和蛋白形状为啥不规则?
子雨环
我的情况类似,自检多法,借相似蛋白跑跑还有注意下封闭的问题。供参考
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问
coip的蛋白裂解液可以用超声破碎吗
balalaLy
超声的目的一是破碎组织和细胞,二是打断核酸形成的粘稠物,这个吹打多几次就可以搞定。破碎组织方便快捷,可以用,但是细胞不需要。可用可不用的步骤那就省略掉。一来省时间,二来减少干扰因素。
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问
请问转出来的膜一边清晰,一边花,还有一张膜直接全花是怎么回事?180mA 90分钟 转膜液也是新配的
异乡人hyq
我分析可能是有气泡或者夹得不紧。
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问
植物蛋白质的提取方法及注意事项?
迟C迟
1、将组织称重,减去EP管重量,研磨一定要充分2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂,冰上裂解半小时3、匀浆(注意低温操作),开20秒,关2秒,共打20次,每次用水冲洗,擦干,超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心,12000转,4℃,30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃
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问
为什么电泳出来的marker一样,转膜后出来的膜条,一个marker清楚,一个marker变粗。
米米米小喵
建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题出在哪。
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问
IP的阴性对照组IgG中出现了目的条带,是我提的蛋白不纯吗,还是其他地方出了问题
米米米小喵
加入的A蛋白抗体和IgG 抗体,在最后一步的煮样中,被β巯基乙醇破坏了结构,变成了重链和轻链,随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同,又被你的B蛋白抗体识别出来,所以显影就出现了条带。
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