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问
wb实验bca定量做了之后内参依旧不齐怎么办😶
Eason老歌迷
BCA测定的是组织内总蛋白的量,但是由于组织内细胞类型比较复杂,所以所测定的某一特定蛋白的浓度并不准确,以所测浓度作为参考电泳,若结果内参不齐,可以根据各条带的灰度对上样量做适当调整,也就是调内参。若是细胞样品的话,BCA测定结果就比较准确了,跑出来基本上内参都是齐的。实在不行做标曲。
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问
WB实验内参不齐,怎么校准?
宁儿小贤
提完蛋白之后做一下BCA蛋白定量,将总蛋白调整到同一量级,例如都是七八百,或者都是一点几,一般上样之后就没问题了
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问
细菌WB实验的注意事项
bamboopiggy
我当时是做蛋白纯化裂的菌,可以直接用裂细胞的lysis裂就可以,但是内参,我没有做过,你要不做个蛋白定量试试
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问
WB结果分析
Eason老歌迷
是一张膜上的吗?如果不是那就可能是哪一步没做好。我看有点像是孵抗体的问题。你一抗二抗怎么孵的
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问
Elisa
Eason老歌迷
两个点是不够的,可以看看说明书
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问
我又来提问了……突然想到……电泳结束一直没有处理,接近1个半小时以后才转膜,会导致条带不显影么?敷了3个抗体都没显影,内参没敷
汤姆卜丽波
很有可能啊,放久了条带都弥散了
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问
Tri-sus实验求指导!
秋秋欣欣
下游测不出应该是引物有问题,引物可以测一下看看
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问
想买电泳跟电转的机器,有国产的跟进口伯乐的两种选择,有大神知道国产的效果怎么样么,感觉只是电极,有必要用进口的么?资金有限……
秋秋欣欣
资金有限的话国产就够了,有钱的话当然是伯乐的更好啦
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问
小胶质细胞标记物IBA1跑不出来
bamboopiggy
胶用15%的,转膜时间改为300mA,至少要1h,或者2h也可以
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问
wb实验,上下槽缓冲液有何要求,怎样才能达到最佳效果?
balalaLy
上槽(内槽)缓冲液要加满,至少要没过玻璃短板多一点点,不然影响整个电泳体系的电流,造成电压不稳,条带跑不好
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问
WB转膜时间与分子量及胶厚度的关系?
bamboopiggy
蛋白分子量越大,胶越厚,转膜时间越长
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问
Western Blot实验40V转膜12小时,时间太长了?有什么影响吗?
bamboopiggy
转膜一般是恒流300/400mA,然后1-2个h就可以。如果您的电流是低的,转12个小时也没有问题。
4 回答
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问
wb实验跑完结果还不错,但是发现中间有个泳道没有加样,我出图的时候可以把中间那个剪切掉吗?这算不算做假图呢?
秋秋欣欣
可以把中间泳道剪掉,重新显影。
3 回答
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问
wb实验的转膜液除了加甲醇的这个配方,还可以用什么配方?感觉每次用完眼睛都疼
Guoood
可试用快速转膜液或使用半干转,有些是不需要甲醇的。但如果使用PVDF膜是必须用甲醇激活的。
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问
wb实验,出的条带是这样的,该怎么改善,
bamboopiggy
下面这条带ok,上面那条带,建议切宽点,然后抗体浓度加大一倍
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问
跑wb出现这种情况,是怎么回事?没有条带,全是黑点点……
秋秋欣欣
是不是转膜的时候,膜活化之前被污染了。
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问
肿瘤组织提蛋白跑WB不齐
balalaLy
组织取出来后称重,每个组取等质量的组织
5 回答
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问
input有带,但是ip部分互作的部分没有带
balalaLy
如果确定蛋白有互作的话可能是提蛋白的过程出了问题,比如所用的裂解液太强了,影响了两个蛋白的结合导致拉一种蛋白的时候另一个没有一起拉下来
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问
做蛋白半定量怎么能标定的一致?
bamboopiggy
用内参,内参一般用的是管家基因,但是不同的处理,可能需要选择不同的内参
4 回答
313 围观
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问
在跑wb的时候,条带都连到一起变成一条线是怎么回事?
bamboopiggy
孔太密了,上样量太大了,导致感觉连到一起了
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