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做WB的一抗二抗重复利用几次需要换
天一湖医者
做WB的一抗二抗重复利用2次就需要换。
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问
WB杂His标签的结果,为什么一大团糊糊的
天一湖医者
应该是你转膜的时候,膜和胶之间没有很好的贴合而导致的空泡。转膜时一定要把膜和胶良好贴合才可以,有一个诀窍是在转膜缓冲液中浸泡着贴合,虽然费点缓冲液,但几乎不会出现空泡现象了。如果你用半干转的话,建议你换成湿转法,也可以降低这个问题出现的概率。
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问
已知蛋白的互作蛋白的筛选
balalaLy
找下游的互作蛋白,过表达或敲低目的蛋白后收集细胞做质谱或组学。
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问
求小鼠肾脏组织NLRP3表达的WB条件
Eason老歌迷
这几个目的蛋白大小的条带,我都跑出来过。我的建议是你转膜时间还是要延长,可能是没转上。然后你跑大蛋白,你的胶可以配10%的跑
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问
ACE2蛋白做wb
秋秋欣欣
是你的蛋白有问题还是抗体的问题呢,蛋白测浓度检测一下吧
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问
竞争ELISA和阻断ELISA的区别是什么呢?
天一湖医者
竞争ELISA和阻断ELISA免疫抗体检测方法都可对小反刍兽疫病毒免疫抗体进行检测,在同一块96孔酶标板中,竞争ELISA和阻断ELISA可以分别检测43份、93份和90份样品,但是竞争ELISA的操作相对比较复杂,且用时较多;阻断ELISA的操作简单,用时少。如果同时检测100份样品,竞争ELISA和阻断ELISA的准确率分别为85%、88%和95%,因此阻断ELISA的准确度和重复性均高于其竞
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问
这个结果可能是因为哪些步骤出现了何种问题啊?
木笔X3T4
多冲几次一抗,或者延长洗的时间
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问
水化上样缓冲液II 和III在哪里用
天一湖医者
一般用于二维电泳和双向电泳实验。
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问
慢病毒液一定要浓缩吗?
一条咸鱼_
要,通常需要浓缩病毒颗粒以获得高滴度,特别是需要感染大量细胞或者用于某些对转导具有抵抗力的细胞系时。
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问
慢病毒感染细胞时一定要用polybrene吗?
Eason老歌迷
Polybrene是带正电的小分子,它可以抵消病毒囊膜和细胞膜表面的阴离子,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常加入polybrene能提高感染效率2~10倍。其实,非VSVG包膜的病毒不用polybrene,这个具体情况要具体分析。
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问
为什么我跑的胶,按照maker剪总会把条带剪丢?
whilt-shirt
有可能是胶的体系不均一导致marker指示不对
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问
原核表达蛋白会出现包涵体,蛋白难以复性,那用真核表达蛋白要如何操作?
天一湖医者
在真核细胞中表达蛋白的步骤比大肠杆菌复杂得多。首先要考虑选用什么载体。一般趋向于使用分泌表达载体,以便于蛋白的纯化。但有的蛋白并不适合于分泌表达,如一些胞质蛋白,非糖基化蛋白等。此外分泌表达的蛋白信号肽存在一个效率问题。有的蛋白即使存在信号肽,也不能分泌。并且有的分泌蛋白较易受到蛋白酶的降解。所有这些因素都需综合考虑。1、克隆 选用合适 的内切酶把外源基因克隆于表达载体的多克隆位点。如果选用的是分
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问
最近做信号通路,为啥上游的蛋白表达降低,下游蛋白表达升高?
balalaLy
上下游蛋白已知的调控关系是促进还是抑制?如果是抑制关系那就是正常,如果是促进,那你可能需要做一下不同的时间点,或者下游蛋白的活化状态。
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问
跑WB时,浓缩胶太长会导致条带连在一起或模糊一片吗?
秋秋欣欣
胶连成一片不是浓缩胶太长的原因,多半是因为样品里盐容量含量太高,被拉着往两边跑
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问
分子伴侣共表达的蛋白纯化
Eason老歌迷
通常机器用线性方法洗脱蛋白这样方法有的时候并不能得到好的纯化效果,可选择不同浓度的咪唑做阶段洗脱,此外可用盐酸胍代替尿素试一试。
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问
WB组蛋白H3K27
Eason老歌迷
我也遇到过这种情况,一个是你用的maker是不是准确,我有一次用的新maker,它就不准。二是你杂带很多,那就说明可能是你封闭没做好,或者是选的抗体特异性不高。
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问
35kb的目的蛋白跑成一条线
balalaLy
同一块胶的其它蛋白没问题,说明是这个抗体的问题。抗体失效、降解
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问
染料法对DNA含量绝对定量
Eason老歌迷
这个A260/280其实就是用来测dna纯度的。用紫外分光光度计测量样品时,不同成分的样品会有不同的吸光度。260纳米(nm)是核酸的最高吸收峰的吸收波长,280nm则是蛋白和酚类的。一般用A260/A280来检验DNA和RNA的纯度,纯DNA的这个比值约为1.8,纯RNA约为2.0.。所以说如果你的dna不纯 你可以先测,然后比对数值,然后纯化。
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问
为什么我跑内参总是出现两个上下相同且平行的条带?
whilt-shirt
这是出现了杂带,有可能是抗体浓度过高,建议增加内参一抗的稀释比例
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问
内参的条带出现深浅不一的话,需要调上样量把他们调的差不多嘛?
whilt-shirt
是的,如果内参不齐审稿人会对你的数据产生质疑
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