WB杂His标签的结果，为什么一大团糊糊的

应该是你转膜的时候，膜和胶之间没有很好的贴合而导致的空泡。转膜时一定要把膜和胶良好贴合才可以，有一个诀窍是在转膜缓冲液中浸泡着贴合，虽然费点缓冲液，但几乎不会出现空泡现象了。

如果你用半干转的话，建议你换成湿转法，也可以降低这个问题出现的概率。

10kb属于小蛋白了，要注意是不是转膜转过了。然后可能是你的纯化后上样没控制好，太多了。还有一个问题就是你想二抗孵的时间要短一点。

应该就是蛋白量太高，你试一下显影的时候把参数调低或者下一次跑的时候降低上样量。