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为什么WB曝光后,sample图里的marker变白色,背景变黑色?
Eason老歌迷
可能是你的膜在实验过程中变干了,可能是洗膜不充分,可能是检测时曝光时间太长了。
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问
WB实验内参经常性出现不齐,重新定量后也会有同样的情况,怎么解决?
麻黄连翘赤小豆
每次上样前可以试一下把蛋白摇一下,长时间冻融可能会导致管子里面蛋白不均匀
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问
求助Western blot的结果如何量化?
Eason老歌迷
可以用ImageJ软件进行Western Blot的量化,
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问
蛋白提取SDS-PAGE相关问题?
申东熙老伯
可能是蛋白浓度太低,浓缩一下试试。
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问
请问在显影过程中胶片变黑了是什么原因,是拿出来之后就曝光了还是其他原因,求解答
Eason老歌迷
是不是在显影液里泡的时间太长了,如果时间太久就容易黑黑一片。
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问
为什么上样25ul跑胶始终是弥散的没有达到浓缩的目的?
申东熙老伯
你的样品是怎么处理的,应该超声破碎之后煮样,加足量的loading就可以了。
6 回答
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问
elisa测量 小鼠IL-22,试剂盒测量范围在31.5-2000,看文献一般波动就在这个范围之内,请问这种情况下还要稀释吗
Eason老歌迷
如果在范围内波动的话,就不用稀释。如果要是都低于最小值,就需要重新在做了。
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问
WB实验曝光膜很脏是因为二抗加多了吗?产生了非特异结合?
Eason老歌迷
膜很脏 有可能是你的封闭时间不够,或者是抗体浓度太高。
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问
RIP实验为什么不能用CHIP实验代替呢?研究蛋白与重复序列的相互作用为什么用RIP不用CHIP呢?
Eason老歌迷
研究蛋白与重复序列的相互作用为什么用RIP不用CHIP呢?是因为chip交联的效率可能只有5%,甚至更低。你也许错过了相当一部分的结合位点。CHIP并不像RIP那样是定量的,它无法区分RNA结合蛋白与这个或那个RNA目标的相对亲和力。
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问
求助如何提高蛋白质的溶解度
还在陆上surg
水温37度,加点盐,减弱分子间作用力。
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问
怎么排出一抗有没有问题
Eason老歌迷
如果有条带,那么说明抗体没问题。条带太弱可能是你的目的蛋白表达量少,也可能是你的抗体浓度不够。
4 回答
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问
为什么WB曝光后,sample图里的marker变白色,背景变黑色?
Eason老歌迷
背景变黑了,是不是封闭时间太短了,或者是你的封闭液没有配好。
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问
为什么跑出来的内参条带会连在一起??
sophomore
一是上样量,需要调整;二是内参的选择,根据实验需要再做优化;还有就是分离胶,积层胶的配制,根据实验方法调整下比例。如果还是跑的条带不满意,可以试用预制胶做,观察下实验结果。
5 回答
432 围观
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问
氨基酸氧化
慕容过
可以试试分子互作试验。找相关生物公司。多种原理可以尝试
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问
从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带? 多谢多谢!
天雨心晴
首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。
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问
WB转膜问题,哪里出了问题呢?
申东熙老伯
转膜之前膜有没有在甲醇里活化呢?Western转膜液最好放在冰箱,天气热。
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问
单克隆抗体和多克隆抗体怎么选?
天一湖医者
1,如果该蛋白在胞质或胞核中表达有多种存在形式,比如磷酸化和非磷酸化,而你需要检测的是其中磷酸化蛋白的,那么就要用单克隆的磷酸化抗体,如果你只是检测这种蛋白,是否存在,就可以用该蛋白的多克隆抗体。2,就是用了磷酸化蛋白的单克隆抗体,多克隆抗体也是必不可少的,因为你同样要使用多克隆抗体,跑个多克隆抗体的条带做对照,这样更能说明磷酸化抗体的表达和活化的情况,我认为这是必须的。并且我已经做的protc
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问
慢病毒过夜浓缩后离心30min没有4℃有影响吗?
Eason老歌迷
肯定是有影响的!一定要放在4℃
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问
wb实验求教
Eason老歌迷
你转膜时间不够,大蛋白比较难转,时间可以稍微延长,我用的湿转都是180ma,120分钟,完全能转上嘎嘎清楚。
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问
内参actin灰度值总是不齐是为什么呢?总是两边的条带更深,中间几条条带更浅
bamboopiggy
感觉是你转膜的原因,转膜的夹子中间可能松了,所以转过去的少
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