石蜡切片提取RNA的方法，有没有人做过呢？求

操作步骤：

1. 准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加51mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL加21mL无水乙醇，混匀；18mL加42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

3. 样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用刀片将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min弃上清。 b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。c）福尔马林固定、未包蜡样本：取30 mg样本，用手术刀剪碎，置于1.5 ml离心管中，加入500 μL生理盐水，涡旋振荡20秒， 12,000 rpm室温离心2 分钟，弃上清。重复2次，转步骤6处理。

4. 在上述处理过脱蜡样本管中加入1.2 mL 无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm 离心 2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可吸水纸吸去，未包蜡样本不需）。

5. 开盖，室温放5分钟，去除残留无水乙醇。

6. 加100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放5分钟。

7. 加20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至完全消化裂解。（消化至溶液中无组织碎片，结缔组织较多切片应适当延长消化时间。）

8. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA提取与后续实验。

9. 将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

10. 将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

11. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留洗涤液。

12. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于实验或-70℃保存。

以下是一种常用的石蜡切片提取RNA的方法：

切片脱蜡：将石蜡切片取下，放置在含有xylene的离心管中，在室温下振荡20分钟，使切片完全脱蜡。

脱水：将切片置于无水乙醇中，浓度从低到高逐渐升高，一般为50%、70%、95%和100%的无水乙醇，每个浓度下静置5分钟，最后在100%的无水乙醇中再次静置10分钟。

空气干燥：将切片空气干燥10-15分钟，以去除乙醇。

去除切片：用刮片将切片刮下，加入离心管中。

组织裂解：加入细胞裂解缓冲液，用超声波打碎组织，使RNA从组织中释放出来。

RNase消化：加入RNase酶，使RNA不受RNase的影响。

氯仿提取：加入等体积的氯仿，离心5-10分钟，将上清液转移至新管中。

RNA沉淀：加入等体积的异丙醇，离心10分钟，将上清液转移至新管中。

RNA洗涤：用75%的无水乙醇洗涤RNA，去除残留的氯仿和异丙醇。

RNA溶解：将RNA溶于适当的缓冲液中，进行后续的实验。