- ￥3897.90
- 阿拉丁
- 上海
- P666038
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温
- 英文名：
Pathogenic Microbiome DNA/RNA Kit
- 库存：
期货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
P666038-50T
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产品简介
本试剂盒是进行微生物组分析的专用样品制备解决方案，适用于从拭子、血液、痰液、肺泡灌洗液等混合样本中纯化和富集细菌、真菌等病原微生物DNA/RNA。用本试剂盒纯化的微生物DNA/RNA适用于多种下游应用，包括全基因组测序分析、基于16S rDNA的高灵敏度微生物组分析、以及宏基因组鸟枪法测序分析
自备试剂及耗材
1. 带有气溶胶屏障的无菌移液器吸头，可防止交叉污染
2. 微量离心管（2 mL/1.5 mL）
3. PBS缓冲液（仅某些样品需要）
4. 异丙醇
实验前准备及重要注意事项
1. 本试剂盒旨在从完整的微生物细胞中分离DNA/RNA，为了保证微生物DNA/RNA的最佳回收效率，样品应保证新鲜。
2. 为避免由于污染造成的错误结果，请保持工作区域清洁和穿防护服，并合理设置对照品进行质控。采用适当措施处理样品材料，降低交叉污染的风险。
3, Buffer GW1（concentrate）和Buffer GW2（concentrate）根据瓶身信息加入相应量的乙醇。
操作步骤
1. 样本前处理：
1a：尿液、胸腹水、脑脊液等非粘稠体液样本
直接取400 μL样本，进行第2步操作。
1b：拭子类样本（如鼻、咽及肛拭子等）
涡旋振荡混匀后，直接取400 μL进行第2步实验。
1c：痰液、肺泡灌洗液样本
取适量液化痰液样本至1.5 mL 离心管中（液化方法推荐使用1.5倍体积的BufferGB1，本试剂盒不提供），12,000 rpm离心5 min，弃上清，使用400μLPBS重悬沉淀后提取。对于含有少量粘稠痰液的肺泡灌洗液，将尽量多的肺泡灌洗液样本先进行离心，小心去除上清，留取下层粘稠部分（含痰液、细胞、菌体）参照痰液样本进行液化处理。
1d：血液类样本
血清、血浆及少量全血样本（少于200 μL）可直接取400 μL（少量全血使用PBS补足）进行第2步实验，大体积全血样本推荐使用红细胞裂解液（CW0613）处理后再进行提取。
2. 向 Lysis Tube 中加入400 µL 样本、20 μL Proteinase K和400 µL Buffer SL-A，于恒温混匀仪上以65℃最大振速（2500~2900 rpm）处理10 min。短暂离心后加入400 µL Buffer GL，继续65℃最大振速（2500~2900 rpm）震荡处理10 min。
3. 室温12000 rpm离心1min，小心吸取全部上清至新离心管中，并加入400 µL异丙醇，涡旋混匀，瞬时离心使溶液收集至管底。
4. 将步骤3所得溶液（包括形成的沉淀）全部加入到已装入收集管的吸附柱，若一次不能加完溶液，可分多次转入（每次不超过700µL）。12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前检查是否已加无水乙醇），12000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复此步骤一次。
6. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加无水乙醇），12000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复此步骤一次。
7. 12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干（5~10min）。
8. 将吸附柱置于一个新离心管（自备）中，向吸附柱中间部位悬空加入70 μL RNase-Free Water，室温放置5分钟，12000 rpm离心1分钟，收集核酸溶液，-20℃保存。
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