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科研学霸天团,48小时有问必答
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细胞合成酪蛋白所需的基础氨基酸来自哪里?
邢晓华I45H
转氨基作用,由糖类、脂肪分解的中间产物转氨基而成的约十二种非必须氨基酸利用。
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问
天然产物生物合成的问题
汤姆卜丽波
同位素示踪法标记,结合生物信息学、分子生物学、分子遗传学以及生物化学等方法来研究天然产物生物合成的精细过程,除了将天然产物结构与相应生物合成基因相对应,还包括阐明生物合成的调控机制。还可以应用基因组测序。
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问
请求专业人士解答内含子lncRNA
Miracle星
lncRNA 的生物功能lncRNA作用范围广泛,机制非常复杂,为了方便大家的理解,我们来简单看看lncRNA的特点:1. 在编码蛋白基因的上游启动子区转录,干扰邻近蛋白编码基因的表达2. 与编码蛋白基因的转录本形成互补双链,调控基因的表达水平3. 结合在特定蛋白质上调节相应蛋白的活性4. 作为小分子RNA的前体分子或者miRNA反义抑制分子5. 作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体lncRN
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问
洗涤RNA沉淀倒上清时候,倒不干净,我可以用枪头吸吗?
Junego
可以,少量残留液用干净小枪头吸,不同样品之间记得换枪头。
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问
体外转录,模版DNA必须是双链吗,单链DNA可以作为模版吗?
汤姆卜丽波
是以一条含有启动子的链为模板的,但是转录是应该还是要双链
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问
为提取结核杆菌的RNA,如何破壁?
未来9
可以采用超声波联合Trizol法、玻璃珠(简称"玻珠")联合Trizol法(简称"玻珠法")和Trizol法(简称"不加玻珠法"),对结核分枝杆菌进行破壁,提取总RNA
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问
提rna时,检测rna浓度时测量的260/280以及260/230数值对后续逆转录以及扩增有影响吗
棒打鲜橙girl
我们实验室一般只看260/280,代表RNA纯度,1.8-2.0最佳,这样跑出来的pcr效果更好,结果较准确
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问
RNA提取结果,遭遇亮区干扰,咋办(・o・)
bamboopiggy
你跑的是动物组织还是植物组织?用的是变性胶还是非变性胶?尝试用RNase处理一下看看还有没有,如果没有,可能是28S降解,如果有,可能是DNA或蛋白质污染。
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问
在对细胞株进行敲低时,设置多组敲低序列是排除脱靶效应(off-target effect)么?如果没有做多组敲低,应该怎么弥补?
balalaLy
赶紧补呗,常规都是做三组,确保有两组以上能用。
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问
提RNA的时候,有的步骤是加完trizol直接加氯仿,有的是加完trizol后离心吸取上清再加氯仿,这两种方式有差别吗
bamboopiggy
加完trizol以后,直接 加氯仿就好,反正也要离心。加了trizol后,离心,是为了去除没有被trizol裂解的组织,再加氯仿,还是要离心的。
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问
反转录时,对于长片段,使用oligodT好呢,还是特异性引物好呢?
天一湖医者
一般情况简单地说你的目的mRNA有playA尾,且基因较小2000bp以内吧都可以选择oligo dT;但如果你的目的mRNA没有playA尾或者你的基因较大时,由于RT酶的扩增能力问题就要用随机引物。
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问
外泌体提取rna后,检测内参不齐,需要引入外参吗?
bamboopiggy
可以引入外参,但是要满足以下条件:1. 与待检的目的RNA在样本中具有一样的存在形式,即囊泡包裹状态存在;2. 在外泌体分离富集过程中与待检外泌体RNA具有一样的动力学行为;3. 在外泌体RNA提取及PCR检测过程中具有一样的效率。也即可以完整的模拟目的基因在整个液体活检过程中的动力学变化。
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问
如何提高提取RNA纯度,避免提取过程中的酚残留?
bamboopiggy
酚与氯仿均起到变性的作用。酚的变性能力强于氯仿,但酚与水有一定的互溶,因此酚抽后,除可能损失部分核酸外,水相中还会残留酚,而酚的存在将对核酸的酶反应产生强的抑制,因此在操作中可单用氯仿作变性剂、也可用酚/氯仿混合变性,也可用单一酚作变性己,但用单一酚后在有机溶剂沉淀时一定要用氯仿重抽提。
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问
病料存放旧后测rna数值偏差大是操作不当还是污染可能性大?
迟C迟
样品放久了测OD不准,可能是RNA已经降解了,测出来估计是污染了。
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问
电泳结果中出现纵向条纹的可能原因是什么?
bamboopiggy
样品中盐的浓度高了,可能需要换lysis
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问
抗炎药效学实验,提RNA
府宅
可能是RNA降解了,RNA变成单核苷酸了,就测不出
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问
请问,在提取RNA ,跑琼脂糖凝胶电泳只能跑出两条带,反转录后最为模板 影响定量的结果吗?
bamboopiggy
一般会看到28s和18s两条带。28s是18s的两倍就可以,一般5s是看不清楚的。所以继续往下做吧,没问题
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问
石蜡包埋切片过程中,4%PFA浸泡组织的时间要求,至少24小时吗?
Topmicro
由你的试验目的决定,随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低,过度延长固定时间,易引起细胞内生物大分子过度交联。
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问
各位大佬,鉴定大肠杆菌O抗原血清除了凝集法,还有其他快速的方法吗?
dxy_gwrp7ndq
酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检查。
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问
用trizol提取总RNA时,在加入氯仿前的步骤都可以放在置于冰上的板子室温静置么?组织加入裂解液后室温放置与插入冰块中有区别么
府宅
上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,其余步骤在冰上操作
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