• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        如何提高提取RNA纯度,避免提取过程中的酚残留?

        相关实验:RNA提取及检测

        user-title

        蛟嫦

        普通手工法

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        酚与氯仿均起到变性的作用。酚的变性能力强于氯仿,但酚与水有一定的互溶,因此酚抽后,除可能损失部分核酸外,水相中还会残留酚,而酚的存在将对核酸的酶反应产生强的抑制,因此在操作中可单用氯仿作变性剂、也可用酚/氯仿混合变性,也可用单一酚作变性己,但用单一酚后在有机溶剂沉淀时一定要用氯仿重抽提。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        得到质量好,纯度高,完整的RNA操作如下:细胞裂解 细胞的获取方式不同,采用的裂解方法也不尽相同。 1)若是组织中提取,按照每50-100mg样品加入1mlTrizol的比例加入Trizol,而后匀浆破碎样品。细胞破碎后在室温下静置5分钟,这样可以分离出核蛋白复合物(nucleoprotein complexes),然后离心去除细胞碎片。 2)若是培养瓶中贴壁细胞,则先用冰PBS洗2次,而后按每10平方厘米区域加入1ml Trizol的比例加入Trizol, 吹打混匀处理。 3)若是悬浮细胞,离心收集细胞,去除培养基,然后加入适量Trizol吹打混匀处理。可以发现这步操作主要用到了Trizol这个试剂。那么Trizol的作用是什么呢?Trizol的主要成分是苯酚,是有效的蛋白变性剂。它能够抑制酶活性包括RNAaes,这样可以保证RNA不会被降解掉,同时Trizol能够使细胞裂解。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序