实验问答21,861,028 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问骨骼肌活检定量分析相关minRNA，如何开展？

Miracle星

试验可以通过设计一个质粒，质粒上含有骨骼肌特异性的启动子，其后跟该miRNA序列。（如果是斑马鱼，可以直接将该质粒通过显微注射的方式注射到斑马鱼的受精卵中，如果是小鼠可以先在细胞水平进行验证，然后在活体水平进行验证）然后将质粒在合适的时间转入你所用实验体系，等待一定时间（自己摸索一下，或者查文献），然后在整体水平以及分子水平对骨骼肌进行评估。实验需要有miRNA组，以及没有miRNA的空白质粒对照

2 回答395 围观

问pcr如何用NCBI设计引物？

bamboopiggy

ncbi主页右侧有个blast，点进去，然后往下拉，有一个primer blast，点进去，然后按照里面的要求填写就可以了

3 回答566 围观

问cDNA长期保存用TE还是处理水

dxy_gwrp7ndq

可以用无菌水-20°保存DNA样品可以保存1到2年没有问题的，但要避免反复冻融，TE还涉及到后续添加的镁离子的溶度、PH的问题

5 回答1103 围观

问做了原核表达，跑了SDS-PAGE但是看不出来差异，所以做了个WB但是全是非特异条带，是怎么回事

冷泉港蛋白

第一张图在100kd位置，是有条带表达的，表达量不高，但有第3张图，28a载体的标签是his，his抗体的特异性很差，所以不要用his去做wb确定是上清还是包涵体后，摇个大样，过下柱子

4 回答467 围观

问求教：lnc RNA干预载体的构建？

天一湖医者

1. 选择合适的载体，依据实验室现有的条件进行选择：plvx-puro，Amp，puro，其他慢病毒载体的原理相似，例如pLenti-puro等 2. 找到基因的CDS区，复制；对于LncRNA，则直接选择全部序列即可 3. 用primer5找到目的基因上没有and载体有的酶切位点 4. 确定酶切效率，在酶边是否需要加保护碱基以提高效率 5. Kozak序列（针对表达蛋白的载体，而对于L过表达载

1 回答199 围观

问关于RNA提取的问题？

bamboopiggy

跑胶的结果，准确，胶回收不同长度的片段，有不同程度的损耗。

3 回答497 围观

问RNA的提取用什么方法最好，检测结果如何最准确？

天一湖医者

常见的RNA提取方法i沉淀法Trizol裂解液是总RNA提取的常用试剂, 内含苯酚、异硫酸胍等物质，能迅速破碎细胞，释放核酸，并抑制细胞释放的核酸酶。1）组织中提取RNA: 第一步需要液氮研磨，将组织块放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织块变软，再次加入液氮研磨，反复三至四次后加入50-100mg/ml的Trizol，转入离心管中，室温放置10min，使其充分裂解。12000rpm，离心5

3 回答712 围观

问提取RNA

Eason老歌迷

肯定会影响啊!你说你一个孔里长的多，一个孔里长得少，怎么分裂解液，多了裂解过火了，少了裂解不足。

3 回答555 围观

问引物设计

天一湖医者

这个原因应该是发生了非特异性结合。

3 回答580 围观

问PCR提取RNA动物组织匀浆

balalaLy

可以用1.5ml的管配套玻璃棒加液氮研磨，很方便

3 回答879 围观

问求助木瓜蛋白酶的使用浓度时间

balalaLy

根据实验需求有不同，比如消化乳鼠脑组织可以用2mg/ml

3 回答2122 围观

问RNA体外转录buffer

天一湖医者

其配方为400 mM Tris-HCl(25℃，pH 8.0)，200 mM MgCl2，25 mM TCEP，20 mM spermidine。

2 回答995 围观

问如果取样时间很长，半天到一天的时间，请问取样之后如何保存才适合下续提取步奏？有人遇到过这种问题吗？求指点

秋秋欣欣

取样时间长的话带个冰盒吧，取好的样先放冰盒里

6 回答415 围观

问请问，我提出来的RNA浓度很低只有18ng/ul，od值也是1.7几，是不是提出来的是蛋白质，不是RNA，有谁出现这种情况吗？

bamboopiggy

你看你读的od值是什么数值的？260/230还是260/280？

3 回答433 围观

问求助：皮肤组织提RNA，难以研磨

dxy_gwrp7ndq

可以组织样品液氮研磨成粉末状，在液氮基本挥发完时，直接在研钵中加 Trizol 试剂继续研磨，由于 Trizol 试剂中含有强烈的 RNA 酶抑制剂，组织样品和 Trizol 充分研磨混匀后能有效抑制 RNA 的降解；再将混合物转移到玻璃匀浆器中进一步匀浆，能使组织中的 RNA 充分释放出来，提高 RNA 产量。在将实验室温度控制在25℃以下的条件下，操作过程尽量在冰盒上操作，避免温度升高加速 R

5 回答2731 围观

问提组织RNA

bamboopiggy

你的od值，是260/230吗？如果不是，建议看一下260/230，这个值在1.8左右才好，感觉就是你测的rna的浓度虚高，导致内参CT值偏高。

3 回答750 围观

问请问sgRNA化学合成靠谱吗

汤姆卜丽波

如果你需要在几天内进行多个sgRNA的转染，以此筛选某个基因重要功能靶点或者需要快速敲除多个基因时；涉及在细胞/基因治疗领域中的CRISPR解决方案时；涉及的细胞是原代T细胞、造血干细胞或祖细胞的基因编辑选择它比较合适

3 回答465 围观

问10%的甲醛溶液可以固定组织吗

yanlai000

可以，10%的甲醛又叫福尔马林，福尔马林一般用于正常组织染色，而4%多聚甲醛多用于需进行免疫组化或免疫荧光等需要进行抗体标记的组织，因此需要根据需要进行组织固定。

5 回答3446 围观

问如何取肌肉组织中的卫星细胞？

汤姆卜丽波

可以把铜网换成不锈钢筛网，这样对细胞损伤少，然后养护也方便

3 回答664 围观

问求助，为什么siRNA后，RNA水平下降了，而蛋白水平一直不降呢？是不是应该用sh啊？

汤姆卜丽波

是不是检测出了问题，再做一次看看还是这个趋势么

4 回答2273 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序