• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        求教:lnc RNA干预载体的构建?

        相关实验:RNA- 蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验

        user-title

        SCIOK

        刚接触实验的小白,后续要做IncRNA,请问过表达和低表达的载体怎么做呢?用什么方法成功率高?需要注意什么问题吗?

        细胞动物层面都会做,又该如何选择更适合的干预方法呢?

        wx-share
        分享

        1 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1. 选择合适的载体,依据实验室现有的条件进行选择:plvx-puro,Amp,puro,其他慢病毒载体的原理相似,例如pLenti-puro等

        2. 找到基因的CDS区,复制;对于LncRNA,则直接选择全部序列即可

        3. 用primer5找到目的基因上没有and载体有的酶切位点

        4. 确定酶切效率,在酶边是否需要加保护碱基以提高效率

        5. Kozak序列(针对表达蛋白的载体,而对于L过表达载体,则不需要RNA)

        6. 取目的基因CDS区两端15~21个碱基(或反向互补链),加上酶切位点和kozak。当然,这个范围可以放宽。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序