扩增1800bp左右cds区全长扩不出来，如果分段设计引物怎么弄？

全长出不来就分开设计也可以啊，只要保证接口酶一致最后连接测序就可以了

可以尝试分段设计引物来扩增。一般而言，可以根据CDS区域的序列信息，设计多对重叠的引物，将CDS区域分成较短的几段，每段长度不超过1000bp，然后逐段扩增。以下是一些分段扩增的建议：

确定CDS区域的边界。可以通过查阅文献、数据库或者基因注释信息等方式获取。

分段设计引物。选择多对引物，每对引物的长度应在18-24 bp之间，GC含量应在40-60%之间。引物的Tm值应该尽可能接近，以避免温度差异对PCR反应的影响。

确定引物的位置。可以在CDS区域的两端或者重叠区域设计引物。如果在CDS区域的两端设计引物，需要保证引物之间的距离不超过1000bp，否则可能会出现扩增失败的情况。如果在重叠区域设计引物，需要保证引物的重叠部分足够长，以确保引物的可靠性。

扩增每段CDS区域。将每一段CDS区域的引物按照标准的PCR反应体系进行扩增，然后进行凝胶电泳或者其他方法进行检测。

需要注意的是，分段扩增虽然可以解决整个CDS区域扩增失败的问题，但是也增加了PCR反应的复杂度和耗时。同时，由于引物设计不当或PCR反应条件不适宜等因素，分段扩增也可能会出现失败的情况。因此，在设计分段扩增方案时需要认真考虑引物的设计和反应条件的优化，以提高扩增成功率。

分段设计的话如果不考虑CG 、 二聚体话,直接在CDS的上下游设计匹配的18-24bp的碱基作为引物即可PCR获得CDS