逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR，rtpcr）

一、总RNA的提取见总RNA的提取相关内容。二、cDNA第一链的合成目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。1．在0.5 ml微量离心管中，加入总RNA 1-5 ug，补充适量的DEP

一、总 RNA 的提取见总 RNA 的提取相关内容。 二、cDNA 第一链的合成目前试剂公司有多种 cDNA 第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以 GIBICOL 公司提供的 SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。 1.在 0.5ml 微量离心管中，加入总 RNA

1、从 -20 ℃ 冰箱取出商品化的 DNA 聚合酶、缓冲 buffer、dNTPs、模板 DNA、引物和无菌双蒸水，置于冰上解冻。2、在冰浴中，按以下次序分布将各成分加入 PCR 管中。PCR 体系：组成成分体积（uL）ddH2Oto 502 × Phanta Max buffer25dNTP Mix（10mM each）1引物 F（10 uM）2引物 R（10 uM）2模板50ngPhanta