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- 英文名:
HiScript II One Step RT-PCR Kit
- 供应商:
南京诺唯赞生物科技有限公司
- 规格:
50 rxns (50 μl/rxn)
HiScript II One Step RT-PCR Kit
一步法高效RT-PCR 试剂盒

病毒检测;基因表达分析;终点法PCR检测

· 逆转录和PCR 在同一管内进行
· 检测灵敏度可达1 pg 总RNA
· 可扩增超过10 kb 的长片段


图1
A. 以Hela细胞总RNA为模板,用HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增555 bp GAPDH片段。检测灵敏度可达到0.1 pg。
B. 以猪蓝耳病毒PRRSV RNA为模板,用HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增660 bp片段。检测灵敏度可达到0.2 TCID50。
C. 以1 μg Hela细胞总RNA为模板,用HiScript II One Step RT-PCR Kit (P611)扩增不同长度的片段。可成功扩增长达12.1 kb的UTRN片段。

本试剂盒专为以RNA 为模板( 如RNA 病毒) 的终点法PCR 检测而设计。使用基因特异引物(GSP),逆转录和PCR 反应在一管内完成,不需要额外的开管/ 移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。整合HiScript II Reverse Transcriptase以及Champagne Taq DNA Polymerase 的优越性能,配合经过优化的缓冲体系,HiScript II One Step RT-PCR Kit 可扩增片段长达10 kb 以上。试剂盒以便捷的Master Mix 形式提供。2 × One Step Mix 包含优化的缓冲体系和dNTPs;One Step Enzyme Mix 包含比例优化的HiScript II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor 以及Champagne Taq plus DNA Polymerase,操作简单快捷。



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文献和实验• 以96孔板方式,从同一个细胞或组织样本中同时纯化基因组 DNA和总RNA • 处理 96 个样本,只需不到60 分钟 • 从同一样本中纯化高品质的基因组DNA和总RNA • 96孔板方式,高效的操作流程 • 高度标准化的操作流程 • 高重复性的DNA和RNA产量 Product description The AllPrep DNA/RNA 96 Kit is well suited for high
SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度(图8),而且对于小量RNA,减少SuperScriptⅡ的量并加入40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元,仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 图9 一步法RT-PCR的灵敏度 使用SuperScriptⅡOne-Step RT-PCR System从0,0.1,1,10,102,103pg Hela
是因为荧光标记得影响),要看你摸的时候不同循环的扩增产物的量之间的关系,在相邻之间的差异基本复合线性增长才是线性期。 一步法还是二步法:我一直不建议采用一步法,因为逆转录酶很贵,就坐一次PCR,多可惜啊!还有RNA。而且反转录了之后可以做10-20次,还可以摸条件找原因。不要以为一步法是盒子,实际上是一样的,操作没有什么不同,还没办法摸条件,早该淘汰了(特指RT-PCR过程中)。对于少量的标本用1ug的反转录酶既可以了,或者用于预实验都是很好的,但是P的时候要多加一点,之所以这些话总是不确定是因为











