• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        关于内参,究竟如何加?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        onlyhere11111

        今天看别人做RT-PCR,整个过程比较清楚,只是内参何时加有些不懂,比如测A、B两个基因,是加入A、B基因的引物制成的体系液里还是循环反应时?还是电泳加样时和加入每个小凹槽内?
        wx-share
        分享

        6 个回答

        user-title

        tingtinggu

        有帮助
        内参就相当于对照,和实验组一样PCR,区别就是实验组加cDNA和primer,而内参只加primer,用DW代替cDNA,剩下的操作都是一样的
        user-title

        lqbzfang

        有帮助
        如果是做mRNA逆转录分析,内参最好选定,表达恒定的基因,如GAP
        user-title

        zhangh111

        有帮助
        你把内参看成是第三个基因,与A 基因、B基因一道做就是了。
        user-title

        pink颦

        有帮助
        内参不是加进去的 是两个细胞比即处理或者检测细胞(A)和对照细胞(B)都稳定表达的基因。一般选择actin-beta等,可以修正对比处理细胞或者检测细胞(A)与对照细胞(B)之间的检测基因的表达差异的倍数。如果效率为100%即每次都是以2的比率递增,则采取2△Ct(△Ct)的方式计算。△Ct(△Ct)即为A细胞的检测基因的Ct-内参基因的Ct的值 与 B细胞检测基因的Ct-内参基因的Ct值 做差.如果效率不是100% 即以小于2的比率递增(A的比率为a1,B的比率为b1)则为a1^△Ct除以a2^△C即可得到表达的相应倍数。其实我觉得你要是想完全看清楚的话  推荐你看一下biorad的关于q-PCR的指南 里面说的很清楚  你可以去biorad的网站下 丁香园文档上面也有~
        user-title

        苏格兰白草莓

        有帮助
         是的,就看做同样的样品中的第三个基因就行了,等于你是做了ABC三个基因,只不过C就是你的内参基因,不是加在A、B里面哈
        user-title

        采芹人sw

        有帮助
        你可以把内参看做第三个基因,A.B怎么做的,他也一样就行了。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序