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        求助,PCR问题

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

        user-title

        泰迪熊LGGY

        两个片段大小分别为770 660,反应体系95度5分钟 95度15秒 52度15秒 68度30秒 44个循环 68度5分钟 4度,但是产物不是一天清晰的带,求助

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        6 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        有很多原因。如果目的条带比较单一且没有杂带,说明循环数偏低,可以适当增加循环数;如果杂带多,目的条带看不清或者很弱,说明整个扩增体系或反应程序有问题,需要优化PCR体系和程序。

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        你这个条带看marker也有一点拖尾,可能是凝胶问题,目的条带还是很亮的,可以用。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可以尝试提高一下退火温度,这样会增加pcr的特异性

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        有很多原因。如果目的条带比较单一且没有杂带,说明循环数偏低,可以适当增加循环数;如果杂带多,目的条带看不清或者很弱,说明整个扩增体系或反应程序有问题,需要优化PCR体系和程序。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑体系内存在降解,你的阳性部分太亮了。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是可能导致PCR反应产物不清晰的一些常见原因:

        模板DNA的质量:模板DNA应该是高质量的,并且需要避免污染,否则会影响PCR反应的特异性和产物的清晰度。

        PCR反应条件:PCR反应体系中的反应条件(如温度、时间、 Mg2+浓度等)需要经过优化,以确保反应条件最适合所扩增的片段大小。

        引物设计:引物需要设计得好,确保特异性,并且需要考虑引物的长度和Tm值等因素,以确保引物的效率和特异性。

        PCR干扰:PCR反应中出现非特异性扩增或者其他PCR干扰可能会导致产物不清晰或者多个带出现,此时可以考虑优化PCR反应体系或者使用其他方法,如聚丙烯酰胺凝胶电泳。

        对于你的PCR反应,你可以尝试优化反应条件,例如尝试使用温度梯度或者优化引物浓度、Mg2+浓度等反应条件来寻找最适合扩增这两个片段的PCR反应条件。如果还存在问题,建议使用其他方法进行确认,例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或者测序等方法。

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