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        【求助】新手求助PCR问题

        丁香园论坛

        1103


        最近一周做的rt-pcr实验,动物肝组织提取RNA。结果β-acitn出现了杂带。这是第4次重复的结果,之前的结果都很好,只是这次有杂带。可能是样品放置时间过长了,肝组织在-40冰箱里未加其他试剂放置20天左右。

        其中的原理好像很复杂,这个我没有专门学习过。问了周围人,有3种说法,1二聚体,2特异结合,3杂dna引入,但都说的不清楚,只是说有可能是这样的。。谁能帮忙分析下是什么原因啊。。。
        优化PCR条件,园子里那么多帖子。
        杂带位于500-700 bp之间很大,应该不是引物二聚体;一般组织样都是保存在-70度或温度更低,温度高了RNA更容易降解,直接导致cDNA质量降低,影响目的基因扩增,这个跟actin杂带无关;apob扩增正常,所以很可能是actin引物污染了

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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