扩增曲线上升后过了十几个循环开始出现非特异性扩增（排除污染因素），请问为什么出现这种现象以及出现了这种现象应该如何解决？
dxy_7nd47tt9
扩增曲线上升后过了十几个循环开始出现非特异性扩增（排除污染因素），请问为什么出现这种现象以及出现了这种现象应该如何解决？
4 个回答
Dr_劉医生
有帮助
扩增的温度过大导致循环次数不够，建议控制温度，或者更换引物。
土井挞克树
有帮助
这种情况可以使用非特异酶来抑制一下。
huarenqiang5
有帮助
考虑以下几点原因:
一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。
二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关。
三是酶的质和量有问题。
解决办法:必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。
dxyc42u
有帮助
可能存在引物二聚体，重新合成引物
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