化学法热启动DNA 聚合酶，EnzymoPure™，阿拉丁

产品简介

本品是 94 kDa 的耐热性 DNA 聚合酶， 通过将 Thermus aquaticus DNA Polymerase 的基因经克隆转化到大肠杆菌中进行表达后，分离提取而得到的，与天然 Taq DNA 聚合酶具有相同的功能。具有 5'→ 3' 聚合酶活性和 5'→ 3' 外切酶活性，但无 3'→ 5' 外 切酶活性。PCR 产物的 3' 端带 A，可克隆至 T 载体。Taq-HS DNA polymerase 是基于 Taq DNA polymerase 升级改造的化学法修饰热启动产品，适用于探针法荧光定量 PCR。

产品组成

使用方法

1. 探针法荧光定量 PCR 反应体系

a. 引物推荐终浓度为 0.2 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调 整；引物长度请设定 18~25 bp，GC 含量为 40%~60%。最佳效率 的扩增目标片段一般为 80~200 bp，设计时应尽量避免发夹结构、二 聚体等复杂结构，并尽可能横跨内含子区域。

b. 探针终浓度推荐为 0.25 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调 整。

c. 模板添加量不应超过总反应体系的 10%，推荐加样量为 1~2 μl。不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的DNA 模板添加量。

2. 探针法荧光定量 PCR 反应程序

质量控制

a.核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37 ℃ 温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。

b.核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37 ℃ 温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。

c.宿主残留检测：将酶液中残留的核酸经 E.coli 16S rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于 10 拷贝。

d.功能检测：能有效扩增多种基因组中的单拷贝基因。